【摘 要】
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目的构建并鉴定人IL-2与EB病毒LMP1融合基因重组BCG(卡介苗)。方法利用RT-PCR从EB病毒阳性的B95-8细胞中获得去除致癌部分的LMP1基因,与扩增的IL-2通过overlap-PCR扩增获得融
【机 构】
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济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院; 济宁医学院基础学院;
【基金项目】
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国家自然科学基金项目(No.31500056);山东省重点研发计划项目(No.2018GSF118137);山东省自然科学基金项目(No.ZR2012HM037);山东省医药卫生科技发展计划项目(No.2017WS339);山东省高等学校科技计划项目(No.J17KB085);济宁医学院青年教师科研扶持基金项目(No.JY2017KJ019);济宁医学院国家自然科学基金培育项目(2016);济
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目的构建并鉴定人IL-2与EB病毒LMP1融合基因重组BCG(卡介苗)。方法利用RT-PCR从EB病毒阳性的B95-8细胞中获得去除致癌部分的LMP1基因,与扩增的IL-2通过overlap-PCR扩增获得融合基因。将融合基因连接到穿梭表达质粒pMV261,进行酶切、PCR及测序鉴定。重组质粒经电转导入BCG,通过Western blot鉴定目标抗原在rBCG中的表达。结果 PCR扩增获得453bp IL-2和1 225bp LMP1,利用overlap-PCR获得1 623bp的融合基因,通过电转仪将重组质粒导入BCG感受态细胞,构建的重组质粒能够在BCG中表达相对分子质量为5.7×104的目的蛋白,Western blot显示该蛋白能被兔IL-2单抗及鼠LMP1单抗识别。结论构建的rBCG能稳定表达融合蛋白,为rBCG的抗肿瘤作用和抗肿瘤疫苗的研发奠定了基础。
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