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目的
分析相对封闭群体中犬种布鲁菌病的病原学和遗传特征。
方法对北京一个实验动物基地饲养的犬进行布鲁菌病检测,包括血清学实验[试管凝集法(TAT)]、菌株鉴定(噬菌体实验和生化检测方法)。采集犬组织(肝、脾和睾丸)标本进行病理组织学检查,对菌株进行基因特征分析[16S rRNA基因测序、荧光定量PCR (RT-PCR)检测血液标本核酸DNA、基因组DNA多位点序列分型(MLST)、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析、多位点可变数目串联重复序列(MLVA)分析和IS711插入序列Southern杂交分析]。
结果51.25% (41/80)的比格犬血清中存在高滴度(≥1∶50)的犬种布鲁菌抗体。80份血液样本的RT-PCR核酸检测全部阳性。病犬肝、脾和睾丸组织中发现有明显的病变和病菌样细胞。血液组织分离出10株细菌,经生化检测和噬菌体实验证实为犬种布鲁菌。对菌株16S rRNA基因测序分析,结果与数据库中犬种布鲁菌完全吻合。MLST、 PFGE和IS711插入序列Southern杂交分析10株菌株,基因型完全相同。MLVA分析发现,10株菌株分为2个不同的基因型。
结论通过血清学、细菌学、组织学、16S rRNA基因测序、MLST、PFGE、MLVA和IS711插入序列Southern杂交全面分析一起犬种布鲁菌病爆发疫情,经MLVA分析发现,犬种布鲁菌在自然环境中,进化为两个相对稳定的MLVA基因型。