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摘要[目的]验证K系抑菌剂对紫长茄细菌性枯萎病的防治效果。[方法]田间试验验证防治效果，实验室平板计数法进行菌药互作关系研究。[结果]室内试验结果表明，K3、K5浓度梯度为0、2、4、6、8、10 mg/L时，对病菌的抑制效果逐渐增强，不仅菌落个数依次减少，且菌落体积变小，6 mg/L以上时，无菌落生长，即抑菌率达100%。在田间防效试验条件下，K3、K5抑菌剂对紫长茄枯萎病防效显著，K5防效达70%～75%；K3防效为65%～70%。[结论]K系抑菌剂对紫长茄细菌性枯萎病有很好的防治效果。
关键词紫长茄；细菌性枯萎病；K系抑菌剂
中图分类号S436.3文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00071-02
作者简介吴健（1990- ），男，安徽安庆人，硕士研究生，研究方向：土壤生态-土传病害控制，Email：wuj927@mail.ustc.edu.cn。*通讯作者，副教授，博士，硕士生导师，从事土壤生态研究，Email：liuyixin@ustc.edu.cn。
收稿日期20131209茄子黄萎病、枯萎病和青枯病均导致植株萎蔫，症状表现相似[1-3]，易被人们混淆。其中，黄萎病多在定植后发生，表现为自下而上枯萎，有些枝条发黄，有些则不[4]；枯萎病多在结果初期发生，也是自下而上枯萎，多呈现一片叶半边黄半边正常现象[3]；青枯病发生后，叶色青绿呈开水烫伤样、后至枯萎[5]。三者病株维管束均有变褐现象，但湿度大时青枯病病株茎横切面可挤出乳白色粘液[3]。
2013年舒城县蔬菜基地的茄子出现局域萎蔫，从取回的病株上分离得到的病原主要为细菌，纯化后，其菌落特征与青枯菌菌落相似，结合典型症状分析，判定该症状为细菌性枯萎病。中国科技大学土壤微生态课题组研究得出拟氨基多糖K系抑菌剂对烟草黑胫病和青枯病有较好的抑制作用和防治效果[5-6]；分析了全国多个地区的青枯菌多态性特征，并将这些菌的种内变异加以聚类[7]；比较了农用链霉素和K系抑菌剂对青枯菌的抑制率，结果表明，K系抑菌剂的效果显著高于前者[8]；也曾将实验室分离纯化的致病性青枯菌回接到植物体，继而逐渐出现枯萎症状。笔者在以往试验的基础上，研究了K3、K5抑菌剂用于已出现萎蔫症状的紫长茄上，并进行了田间试验，旨在为紫长茄细菌性枯萎病的防治提供科学依据。
1材料与方法
1.1材料K3、K5抑菌剂（可溶粉剂）由中国科学技术大学地空学院土壤微生态实验室研制；解析出K3实验分子式：C21H47O14N9S4；K5分子式待解析。试验田块为安徽省六安市舒城县现代农业科技示范园蔬菜基地试验田。供试作物为紫长茄，品种为黑丰长美。枯萎病病菌于2013年5月在安徽六安市舒城县蔬菜基地紫长茄细菌性枯萎病植物体上分离得到。
1.2方法
1.2.1室内抑菌试验。
1.2.1.1菌悬液的配制。挑取斜面保存的枯萎病菌菌落，接入配好的营养琼脂（牛肉膏、蛋白胨）NA液体培养基[9-10]，放入35 ℃培养箱中培养18 h，制成菌悬液。
1.2.1.2含药培养基的制备。分别配制K3、K5抑菌剂（梯度为0、2、4、6、8、10 mg/L）的母液1 000 mg/L。分别取60.0、59.9、59.8、59.6、59.5、59.4 ml液体培养基，加入0.9 g琼脂以后，与枪头、培养皿、无菌水一起灭菌，冷却至40～50 ℃后分别加入0.12、0.24、0.36、0.48、0.60 ml母液，每个浓度倒6个培养皿（3个备用），做标记，待冷却为固体培养基平板。
1.2.1.3抑菌效果的测定。将配制好的菌悬液稀释为2×103 cfu/ml左右，在无菌条件下，用移液枪取80 μl稀释液滴至制备好的固体培养基平板表面，并用涂布棒将其涂均匀，放置10～20 min后移入35 ℃恒温箱中，18 h后观察并记录各平板表面菌落大小和个数。
1.2.2田间试验。
1.2.2.1试验设计。共设置3个处理，每处理3次重复，共9个小区，每区20 m2。处理①（空白对照）：移栽后，按当地常规灌清水定根，每株灌200 ml左右。处理②：移栽后，用K5小袋（10 g）对水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。处理③：移栽后，用K3小袋（10 g）对水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。
于2013年4月19日移植，移植当天进行了上述处理。于2013年5月22日分别追灌药剂1次，用量同前。试验处理后，于发病中期和发病高峰期进行了田间病情调查，分别为2013年6月19、7月17日，并将2次结果进行比较，以分析药剂对枯萎病的防治效果。
1.2.2.2药效调查方法。药效按小区调查，记录每小区总株数、病级、病情指数。分级标准如下：0级：植株健壮无病；Ⅰ级：植株顶端1～2片叶出现萎蔫现象；Ⅲ级：植株呈萎蔫叶片3～5片（晚间恢复）；Ⅴ级：植株有1/3叶片萎蔫或侧枝萎蔫。Ⅶ级：植株有1/2叶、枝萎蔫，无明显恢复；Ⅸ级：植株全株萎蔫枯死。
计算病株率、病情指数、防治效果公式如下：病情指数=∑（各级病株数×相对级数值）/（调查总株数×9）×100；发病率（%）=发病株数/调查总株数×100；病株防效（%）=（对照区病株数-施药区病株数）/对照区病株数×100。
1.3数据分析采用Excel 2007、GraphPad Prism 5软件进行数据分析。
2结果与分析
2.1室内抑菌效果
2.1.1K3抑菌效果。从图1、2可见，随着K3浓度的增加，平板上菌落个数逐渐减少。0 mg/L时菌落个数为150余个，2、4 mg/L时菌落个数小于50个，6 mg/L时仅有25个菌落，>6 mg/L时无菌落出现，其中，2～6 mg/L时K3抑菌率60%以上，8 mg/L时K3的抑菌率达100%。
关键词紫长茄；细菌性枯萎病；K系抑菌剂
中图分类号S436.3文献标识码A文章编号0517-6611（2014）01-00071-02
作者简介吴健（1990- ），男，安徽安庆人，硕士研究生，研究方向：土壤生态-土传病害控制，Email：wuj927@mail.ustc.edu.cn。*通讯作者，副教授，博士，硕士生导师，从事土壤生态研究，Email：liuyixin@ustc.edu.cn。
收稿日期20131209茄子黄萎病、枯萎病和青枯病均导致植株萎蔫，症状表现相似[1-3]，易被人们混淆。其中，黄萎病多在定植后发生，表现为自下而上枯萎，有些枝条发黄，有些则不[4]；枯萎病多在结果初期发生，也是自下而上枯萎，多呈现一片叶半边黄半边正常现象[3]；青枯病发生后，叶色青绿呈开水烫伤样、后至枯萎[5]。三者病株维管束均有变褐现象，但湿度大时青枯病病株茎横切面可挤出乳白色粘液[3]。
2013年舒城县蔬菜基地的茄子出现局域萎蔫，从取回的病株上分离得到的病原主要为细菌，纯化后，其菌落特征与青枯菌菌落相似，结合典型症状分析，判定该症状为细菌性枯萎病。中国科技大学土壤微生态课题组研究得出拟氨基多糖K系抑菌剂对烟草黑胫病和青枯病有较好的抑制作用和防治效果[5-6]；分析了全国多个地区的青枯菌多态性特征，并将这些菌的种内变异加以聚类[7]；比较了农用链霉素和K系抑菌剂对青枯菌的抑制率，结果表明，K系抑菌剂的效果显著高于前者[8]；也曾将实验室分离纯化的致病性青枯菌回接到植物体，继而逐渐出现枯萎症状。笔者在以往试验的基础上，研究了K3、K5抑菌剂用于已出现萎蔫症状的紫长茄上，并进行了田间试验，旨在为紫长茄细菌性枯萎病的防治提供科学依据。
1材料与方法
1.1材料K3、K5抑菌剂（可溶粉剂）由中国科学技术大学地空学院土壤微生态实验室研制；解析出K3实验分子式：C21H47O14N9S4；K5分子式待解析。试验田块为安徽省六安市舒城县现代农业科技示范园蔬菜基地试验田。供试作物为紫长茄，品种为黑丰长美。枯萎病病菌于2013年5月在安徽六安市舒城县蔬菜基地紫长茄细菌性枯萎病植物体上分离得到。
1.2方法
1.2.1室内抑菌试验。
1.2.1.1菌悬液的配制。挑取斜面保存的枯萎病菌菌落，接入配好的营养琼脂（牛肉膏、蛋白胨）NA液体培养基[9-10]，放入35 ℃培养箱中培养18 h，制成菌悬液。
1.2.1.2含药培养基的制备。分别配制K3、K5抑菌剂（梯度为0、2、4、6、8、10 mg/L）的母液1 000 mg/L。分别取60.0、59.9、59.8、59.6、59.5、59.4 ml液体培养基，加入0.9 g琼脂以后，与枪头、培养皿、无菌水一起灭菌，冷却至40～50 ℃后分别加入0.12、0.24、0.36、0.48、0.60 ml母液，每个浓度倒6个培养皿（3个备用），做标记，待冷却为固体培养基平板。
1.2.1.3抑菌效果的测定。将配制好的菌悬液稀释为2×103 cfu/ml左右，在无菌条件下，用移液枪取80 μl稀释液滴至制备好的固体培养基平板表面，并用涂布棒将其涂均匀，放置10～20 min后移入35 ℃恒温箱中，18 h后观察并记录各平板表面菌落大小和个数。
1.2.2田间试验。
1.2.2.1试验设计。共设置3个处理，每处理3次重复，共9个小区，每区20 m2。处理①（空白对照）：移栽后，按当地常规灌清水定根，每株灌200 ml左右。处理②：移栽后，用K5小袋（10 g）对水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。处理③：移栽后，用K3小袋（10 g）对水50 kg，1/5 000倍灌根，每株200 ml左右。
于2013年4月19日移植，移植当天进行了上述处理。于2013年5月22日分别追灌药剂1次，用量同前。试验处理后，于发病中期和发病高峰期进行了田间病情调查，分别为2013年6月19、7月17日，并将2次结果进行比较，以分析药剂对枯萎病的防治效果。
1.2.2.2药效调查方法。药效按小区调查，记录每小区总株数、病级、病情指数。分级标准如下：0级：植株健壮无病；Ⅰ级：植株顶端1～2片叶出现萎蔫现象；Ⅲ级：植株呈萎蔫叶片3～5片（晚间恢复）；Ⅴ级：植株有1/3叶片萎蔫或侧枝萎蔫。Ⅶ级：植株有1/2叶、枝萎蔫，无明显恢复；Ⅸ级：植株全株萎蔫枯死。
计算病株率、病情指数、防治效果公式如下：病情指数=∑（各级病株数×相对级数值）/（调查总株数×9）×100；发病率（%）=发病株数/调查总株数×100；病株防效（%）=（对照区病株数-施药区病株数）/对照区病株数×100。
1.3数据分析采用Excel 2007、GraphPad Prism 5软件进行数据分析。
2结果与分析
2.1室内抑菌效果
2.1.1K3抑菌效果。从图1、2可见，随着K3浓度的增加，平板上菌落个数逐渐减少。0 mg/L时菌落个数为150余个，2、4 mg/L时菌落个数小于50个，6 mg/L时仅有25个菌落，>6 mg/L时无菌落出现，其中，2～6 mg/L时K3抑菌率60%以上，8 mg/L时K3的抑菌率达100%。