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【摘要】目的：建立宽叶缬草挥发油中有效成分乙酸龙脑酯的气相色谱测定法。方法：色谱条件为DB-WAX毛细管色谱柱（0.32mm×25m），程序升温60℃10℃/min120℃6℃/min140℃10℃/min230℃（5min），分流比为30∶1，FID检测器，内标为萘。结果：乙酸龙脑酯在0.016～0.250mg范围内呈线性关系（r=0.99999），加样平均回收率为104.85%。结论：建立的方法简便、灵敏、易操作，为宽叶缬草植物资源的开发利用奠定基础。
【关键词】宽叶缬草；乙酸龙脑酯；气相色谱法
【中图分类号】R927.11【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）21-0023-03
Determination of Bornyl Acetate in Volatile oil of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq by GC
HU LixiaWANG XiaoxianZHAO Ming*
Wuhan Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Wuhan 430022，China
Abstract：Objecive To develop a reliable method for determination of bornyl acetate in volatile oil of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq by gas chromatography. Methods A DB-WAX quartz capillary column was used and the temperature of column （0.32mm×25m） was programmed：程序升温60℃10℃/min120℃6℃/min140℃10℃/min230℃（5min），The splitting ratio was 1∶[KG-*3/5]30. The FID was used as detector，and the naphthalene as internal standard. Results The standard curve was linear in the concentration range of 0.016～0.250mg/mL.The average recovery was 104.85%. Conclusion The new method can be used for quality assessment of leaves of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq. It was rapid，sensitive， precise with good reproducibility.
Keywords：Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq.；Bornyl Acetate；GC
败酱科缬草属植物宽叶缬草（Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq.），在我国南部各省区广为分布，根及根茎入药，具有解表散寒，活血调经，祛风除湿，镇痛解痉的作用[1]。以宽叶缬草根为原料经水蒸气蒸馏所得精油，为很好的香料和调香剂，在食品饮料、化妆品工业中有广泛用途[2]。采用GC-MS测定其成分主要为乙酸龙脑酯（bornyl acetate）[3]，具有止泻、镇痛、抗炎及解痉的作用[4]。本文建立了以萘为内标，气相色谱法测定宽叶缬草精油中乙酸龙脑酯的含量，为宽叶缬草生药质量评价提供依据，并对采集于湖北不同地区的样品进行了测定。
1仪器与材料
1.1仪器美国安捷伦6890N气相色谱仪；DB-WAX毛细管柱。
1.2材料药材分别采集于湖北西部恩施、宣恩、利川、巴东地区，经武汉大学药学院王有为教授鉴定为败酱科缬草属宽叶缬草。乙酸龙脑酯对照品（中国药品生物制品检定所）；内标萘（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。
2方法
2.1色谱条件色谱柱DB-WAX毛细管柱（0.32mm×25m），程序升温60℃10℃/min120℃6℃/min140 ℃10℃/min230℃（5min），分流比为30∶1，氢火焰离子化检测器（FID），进样口和检测器温度为250℃，流速为1mL/min，进样量1uL。色谱图见图1。
2.2标准溶液的制备精密称取乙酸龙脑酯适量，加无水乙醇制成4.16mg/mL的溶液。
2.3内标溶液精密称取萘适量，加无水乙醇制成1.01mg/mL的溶液。
2.4供试品溶液的制备精密称取挥发油50mg置10mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取该溶液和内标溶液各1mL，摇匀，即得。
2.5标准曲线试验精密吸取对照品储备液0.038、0.075、0.15、0.3、0.6mL，分别置于10mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.016、0.031、0.062、0.125、0.250mg/mL的乙酸龙脑酯溶液；分别精密量取不同浓度溶液和内标溶液各1mL，摇匀。分别进样测定，每次1uL。以乙酸龙脑酯浓度对乙酸龙脑酯与内标峰面积之比进行线性回归。结果表明乙酸龙脑酯浓度在0.016～0.250mg范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为Y=1.40847X-0.001131 （r=0.99999）。
2.6精密度和重复性试验对同一供试品溶液连续测定6次，结果乙酸龙脑酯峰面积RSD=0.47%。对同一样品从取样开始重复测定6次，结果乙酸龙脑酯峰面积RSD=1.69%。 2.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别在放置0、2、4、8、12、14h后，依法测定乙酸龙脑酯的峰面积，结果表明同一供试品溶液中被测成分在14h内基本稳定，RSD值为1.82%。
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品约50mg，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1mL 5份，精密加入对照品溶液1mL，摇匀。依法测定，测得平均加样回收率为104.85%。
2.9样品的测定精密称取宽叶缬草药材40g，置挥发油提取器中，加水500mL，提取4h。精密称取精油50mg，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液和内标溶液各1mL，摇匀，量取1uL进样。依法测定不同采挖时间不同地区的湖北宽叶缬草样品。结果见表1。
3讨论
采用GC法对宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯进行含量测定，为其质量控制提供了依据，也为宽叶缬草药材的质量标准建立奠定了基础。
供试品的制备考察了样品与内标溶液浓度，确定5uL/mL的样品溶液与1mg/mL的内标溶液等体积混合成供试品溶液。色谱条件考察了不同分流比、载气流速与升温程序，分别确定30∶1的分流比，1mL/min的载气流速，及60℃、120℃、140 ℃、230℃（5min）的升温程序进行测定。在此条件下分离效果好，乙酸龙脑酯峰及内标峰与相邻峰完全分离。
测定结果表明产于湖北不同地区、不同采挖年限的宽叶缬草样品中乙酸龙脑酯含量存在着差异，而是否与植被分布的生态环境、海拔高度、采挖年限因素有关，有待探讨。
参考文献
[1]
都晓伟，吴军凯. 缬草属植物化学成分及药理活性研究进展[J]. 现代药物与临床，2006，21 （1）：10-14.
[2] 陈建华，申会建，聂长明. 湖南山区宽叶缬草的利用价值[J]. 湖南林业科技，1993，20（1）：36-37.
[3] 王立群，熊义涛，陶福华，等. 宽叶缬草挥发油成分分析[J]. 中药材，1996，22（6）：289-299.
[4] 李晓光，叶富强，徐鸿华. 砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究[J]. 华西药学杂志，2001，16（5）：78-79.
（编辑：陶希睿）
【关键词】宽叶缬草；乙酸龙脑酯；气相色谱法
【中图分类号】R927.11【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2016）21-0023-03
Determination of Bornyl Acetate in Volatile oil of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq by GC
HU LixiaWANG XiaoxianZHAO Ming*
Wuhan Hospital of Integrated Chinese and Western Medicine， Wuhan 430022，China
Abstract：Objecive To develop a reliable method for determination of bornyl acetate in volatile oil of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq by gas chromatography. Methods A DB-WAX quartz capillary column was used and the temperature of column （0.32mm×25m） was programmed：程序升温60℃10℃/min120℃6℃/min140℃10℃/min230℃（5min），The splitting ratio was 1∶[KG-*3/5]30. The FID was used as detector，and the naphthalene as internal standard. Results The standard curve was linear in the concentration range of 0.016～0.250mg/mL.The average recovery was 104.85%. Conclusion The new method can be used for quality assessment of leaves of Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq. It was rapid，sensitive， precise with good reproducibility.
Keywords：Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq.；Bornyl Acetate；GC
败酱科缬草属植物宽叶缬草（Valeriana officinalis L.var.latifolia Miq.），在我国南部各省区广为分布，根及根茎入药，具有解表散寒，活血调经，祛风除湿，镇痛解痉的作用[1]。以宽叶缬草根为原料经水蒸气蒸馏所得精油，为很好的香料和调香剂，在食品饮料、化妆品工业中有广泛用途[2]。采用GC-MS测定其成分主要为乙酸龙脑酯（bornyl acetate）[3]，具有止泻、镇痛、抗炎及解痉的作用[4]。本文建立了以萘为内标，气相色谱法测定宽叶缬草精油中乙酸龙脑酯的含量，为宽叶缬草生药质量评价提供依据，并对采集于湖北不同地区的样品进行了测定。
1仪器与材料
1.1仪器美国安捷伦6890N气相色谱仪；DB-WAX毛细管柱。
1.2材料药材分别采集于湖北西部恩施、宣恩、利川、巴东地区，经武汉大学药学院王有为教授鉴定为败酱科缬草属宽叶缬草。乙酸龙脑酯对照品（中国药品生物制品检定所）；内标萘（色谱纯，国药集团化学试剂有限公司）；无水乙醇（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）。
2方法
2.1色谱条件色谱柱DB-WAX毛细管柱（0.32mm×25m），程序升温60℃10℃/min120℃6℃/min140 ℃10℃/min230℃（5min），分流比为30∶1，氢火焰离子化检测器（FID），进样口和检测器温度为250℃，流速为1mL/min，进样量1uL。色谱图见图1。
2.2标准溶液的制备精密称取乙酸龙脑酯适量，加无水乙醇制成4.16mg/mL的溶液。
2.3内标溶液精密称取萘适量，加无水乙醇制成1.01mg/mL的溶液。
2.4供试品溶液的制备精密称取挥发油50mg置10mL量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，精密量取该溶液和内标溶液各1mL，摇匀，即得。
2.5标准曲线试验精密吸取对照品储备液0.038、0.075、0.15、0.3、0.6mL，分别置于10mL量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.016、0.031、0.062、0.125、0.250mg/mL的乙酸龙脑酯溶液；分别精密量取不同浓度溶液和内标溶液各1mL，摇匀。分别进样测定，每次1uL。以乙酸龙脑酯浓度对乙酸龙脑酯与内标峰面积之比进行线性回归。结果表明乙酸龙脑酯浓度在0.016～0.250mg范围内呈良好的线性关系，其线性回归方程为Y=1.40847X-0.001131 （r=0.99999）。
2.6精密度和重复性试验对同一供试品溶液连续测定6次，结果乙酸龙脑酯峰面积RSD=0.47%。对同一样品从取样开始重复测定6次，结果乙酸龙脑酯峰面积RSD=1.69%。 2.7稳定性试验精密吸取同一供试品溶液，分别在放置0、2、4、8、12、14h后，依法测定乙酸龙脑酯的峰面积，结果表明同一供试品溶液中被测成分在14h内基本稳定，RSD值为1.82%。
2.8加样回收率试验精密称取已知含量的样品约50mg，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取1mL 5份，精密加入对照品溶液1mL，摇匀。依法测定，测得平均加样回收率为104.85%。
2.9样品的测定精密称取宽叶缬草药材40g，置挥发油提取器中，加水500mL，提取4h。精密称取精油50mg，置10mL量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液和内标溶液各1mL，摇匀，量取1uL进样。依法测定不同采挖时间不同地区的湖北宽叶缬草样品。结果见表1。
3讨论
采用GC法对宽叶缬草挥发油中乙酸龙脑酯进行含量测定，为其质量控制提供了依据，也为宽叶缬草药材的质量标准建立奠定了基础。
供试品的制备考察了样品与内标溶液浓度，确定5uL/mL的样品溶液与1mg/mL的内标溶液等体积混合成供试品溶液。色谱条件考察了不同分流比、载气流速与升温程序，分别确定30∶1的分流比，1mL/min的载气流速，及60℃、120℃、140 ℃、230℃（5min）的升温程序进行测定。在此条件下分离效果好，乙酸龙脑酯峰及内标峰与相邻峰完全分离。
测定结果表明产于湖北不同地区、不同采挖年限的宽叶缬草样品中乙酸龙脑酯含量存在着差异，而是否与植被分布的生态环境、海拔高度、采挖年限因素有关，有待探讨。
参考文献
[1]
都晓伟，吴军凯. 缬草属植物化学成分及药理活性研究进展[J]. 现代药物与临床，2006，21 （1）：10-14.
[2] 陈建华，申会建，聂长明. 湖南山区宽叶缬草的利用价值[J]. 湖南林业科技，1993，20（1）：36-37.
[3] 王立群，熊义涛，陶福华，等. 宽叶缬草挥发油成分分析[J]. 中药材，1996，22（6）：289-299.
[4] 李晓光，叶富强，徐鸿华. 砂仁挥发油中乙酸龙脑酯的药理作用研究[J]. 华西药学杂志，2001，16（5）：78-79.
（编辑：陶希睿）