猪瘟病毒荧光定量PCR标准阳性模板的构建

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【摘要】

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设计扩增猪瘟病毒（swine fever virus，SFV）核酸5′端非翻译区的引物，采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD-18 simple T质粒，重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，提取质粒经PCR和

【作者】

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陆永干戴贤君姚建红黄利权

【机构】

：

浙江大学动物科学学院,杭州市畜牧兽医局,中国计量学院生命科学学院

【出处】

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浙江农业学报

【发表日期】

：

2009年1期

【关键词】

：

猪瘟病毒荧光定量PCR 重组质粒 swine fever virus fluorescent quantitative PCR （FQ-PCR） rec

【基金项目】

：

杭州市农业发展基金扶持项目

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设计扩增猪瘟病毒（swine fever virus，SFV）核酸5′端非翻译区的引物，采用RT-PCR方法克隆目的片段并插入PMD-18 simple T质粒，重组质粒转化大肠杆菌DH5α感受态细胞，提取质粒经PCR和序列测定证实为阳性重组质粒，命名为pSF。将构建的pSF作为标准阳性模板进行荧光定量PCR（FQ-PCR）检测表明，此模板在-20℃保存6个月对结果无显著影响；对于1×10^9，1×10^7，1×10^5拷贝／2μl的pSF用FQ-PCR方法测定的Ct值最大变

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