【摘 要】
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目的探讨搭载有脑源性神经营养因子(BDNF)的聚乳酸－羟基乙酸共聚物(PLGA)/氧化石墨烯(GO)纳米纺丝纤维膜对神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响及其对脊髓损伤的修复作用。方法制备PLGA/GO纳米纺丝膜并物理吸附BDNF，采用扫描电镜观察PLGA/GO纺丝膜的微观结构。采用ELISA测定BDNF在PLGA/GO纺丝膜上的搭载效率和释放曲线。将NSCs接种在PLGA/GO和PLGA/GO/B
【机 构】
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目的探讨搭载有脑源性神经营养因子(BDNF)的聚乳酸－羟基乙酸共聚物(PLGA)/氧化石墨烯(GO)纳米纺丝纤维膜对神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响及其对脊髓损伤的修复作用。
方法制备PLGA/GO纳米纺丝膜并物理吸附BDNF，采用扫描电镜观察PLGA/GO纺丝膜的微观结构。采用ELISA测定BDNF在PLGA/GO纺丝膜上的搭载效率和释放曲线。将NSCs接种在PLGA/GO和PLGA/GO/BDNF材料表面，采用MTT法对各组的吸光度值进行测定，利用免疫荧光和PCR对β3微管蛋白(Tuj－1)表达进行观察。随后将30只雌性SD大鼠按随机数字表法分为损伤对照组(10只)、PLGA/GO组(10只)和PLGA/GO/BDNF组(10只)，利用维纳斯剪切割T9脊髓组织建立脊髓半切损伤动物模型，PLGA/GO组和PLGA/GO/BDNF组分别将对应的纳米纺丝膜原位移植覆盖于损伤处。造模后1，7，14和28 d利用BBB评分对大鼠的运动功能进行评价。于伤后1个月时取材，免疫荧光染色观察神经元特异性核蛋白(NeuN)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。
结果扫描电镜结果显示，PLGA/GO纺丝膜为不规则的光滑纤维样结构，纤维直径(987.5±176.3)nm，NSCs可以在纺丝膜上正常分化为神经元。ELISA结果显示，PLGA/GO纺丝膜对BDNF的负载率约为47.5%；释放曲线显示，BDNF在第1天首先释放30%左右，随后至第21天释放至60%左右。MTT和PCR结果显示，PLGA/GO/BDNF组的吸光度(A)值和Tuj－1表达显著高于PLGA/GO组(P<0.05)。造模后28 d，PLGA/GO/BDNF组BBB评分为(15.3±0.7)分，显著高于损伤对照组的(11.8±0.8)分和PLGA/GO组的(12.7±0.8)分(P<0.05)。免疫荧光结果显示，PLGA/GO/BDNF组NeuN表达为(13.7±2.2)个，显著高于损伤对照组的(4.3±2.9)个(P<0.05)；PLGA/GO/BDNF组GFAP表达为(25.6±4.3)%，显著低于损伤对照组的(38.5±6.2)%和PLGA/GO组的(36.7±7.3)%(P<0.05)。
结论搭载有BDNF的PLGA/GO纳米纺丝纤维膜可以在体外有效促进NSCs增殖和神经元向分化，并通过体内损伤处原位移植有效修复脊髓损伤。
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