【摘 要】
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以鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-T Simple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1.筛选阳性质粒
【机 构】
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中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;
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以鹅细小病毒(Goose parvovirus, GPV)HG5/82株基因组作为PCR反应模板,扩增vp基因3端长864bp的基因片段,将其克隆到pMD18-T Simple克隆载体后转化入大肠杆菌TG1.筛选阳性质粒,并通过BamHⅠ和Hind Ⅲ将外源基因定向克隆到原核表达载体pET-30a,阳性重组质粒经确证性序列测定,证明外源片断插入到pET-30a的预期位置.将其转入大肠杆菌BL21,经终浓度为0.6mmol/L的IPTG诱导,SDS-PAGE表明外源基因获得表达,融合蛋白分子量约为34kDa.将诱导后的工程菌用6mol/L盐酸胍裂解,经超声处理后离心,利用镍离子亲和树脂对裂解产物的上清进行纯化.用纯化的融合蛋白免疫新西兰白兔制备兔抗该融合蛋白的抗血清.West blotting结果表明制备的兔抗血清与该融合蛋白及亲本病毒的结构蛋白都具有反应性.结合前期工作进展对GPV VP蛋白的B细胞线性抗原表位进行定位.
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