【摘 要】
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目的建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养层,用于胚胎干细胞的培养。方法取12．5～14．5胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,在37℃时,用0．25%胰蛋白酶(含0．02%EDTA)消化组织块5 min,培养3 d
【机 构】
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内蒙古医学院基础医学院; 第四军医大学西京医院整形外科; 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室; 内蒙古医学院基础医学院;
【基金项目】
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国家重点基础研究发展规划资助项目(2005CB522603);国家自然科学基金(30230370，30400172)
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目的建立小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)滋养层,用于胚胎干细胞的培养。方法取12．5～14．5胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,在37℃时,用0．25%胰蛋白酶(含0．02%EDTA)消化组织块5 min,培养3 d后传代。采用20mg/L丝裂霉素C处理胚胎成纤维细胞2～4 h,或γ-射线21 Gy照射胚胎成纤维细胞1 h后制备出的滋养层细胞,均能有效地抑制胚胎干细胞的分裂,且不影响其活力。结果胎鼠分离原代成纤维细胞经20 mg/L丝裂霉素C处理或γ-射线21 Gy照射后细胞仍保持分泌多种生长因子的能力,在12 d内既不增殖,也不死亡。结论这种方法制备的滋养细胞层适用于胚胎干细胞的培养。
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