【摘 要】
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目的 应用比较蛋白质组学分析方法筛选组织工程化软骨成熟过程中变化显著的细胞外基质蛋白,通过线性相关分析,研究与软骨力学性能相关的蛋白.方法 分离人胎儿软骨细胞培养并扩增,接种到聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架材料,体外培养4周后随机分为3组,每组6例,A组继续体外培养6周、B组回植裸鼠体内培养6周、C组回植裸鼠体内培养12周.取材后进行大体观察、湿重及体积测定、组织学及生物力学等相关检测,
【机 构】
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200011上海,上海交通大学医学院附属第九人民医院整形外科、上海市组织工程研究重点实验室,中科院大连化学物理研究所,湖南省郴州市人民医院,中科院大连化学物理研究所,中科院大连化学物理研究所,2000
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目的 应用比较蛋白质组学分析方法筛选组织工程化软骨成熟过程中变化显著的细胞外基质蛋白,通过线性相关分析,研究与软骨力学性能相关的蛋白.方法 分离人胎儿软骨细胞培养并扩增,接种到聚羟基乙酸/聚乳酸(PGA/PLA)支架材料,体外培养4周后随机分为3组,每组6例,A组继续体外培养6周、B组回植裸鼠体内培养6周、C组回植裸鼠体内培养12周.取材后进行大体观察、湿重及体积测定、组织学及生物力学等相关检测,比较体内外构建软骨与天然软骨形成质量上的差异.同时进行蛋白质组学分析,选择细胞外基质中比值大于2倍的蛋白与相应各组杨氏模量做相关性分析,根据相关系数筛选与软骨力学性能最相关的蛋白.结果 3组均能在体内外形成透明软骨样组织,C组和B组软骨外观近似天然成人软骨,组织学显示大量成熟软骨陷窝,而A组形成的软骨组织结构较松散,组织学可见不规则肥大软骨陷窝.C组湿重和生物力学检测分别为(372.5±35.4) mg和(8.68±2.65) MPa,明显高于B组的(346±34.5) mg和(3.25±1.24)MPa (P＜0.01),而A组为(184.4±12.28) mg和(0.7±0.23) MPa.应用蛋白质组学技术检测到细胞外基质中共44个差异蛋白,选择胞外基质中C组和A组之间差异最大的6个蛋白,与相应各组杨氏模量进行线性相关分析,发现核心蛋白聚糖(Decorin)、软骨粘附素(Chondroadherin)和纤调蛋白(Fibromodulin)与软骨力学性能变化显著相关(P＜0.05).结论 蛋白质组学技术能够提供大量的蛋白质信息,组织构建与比较蛋白质组学技术相结合,有利于进一步分析组织工程化软骨胞外基质蛋白与力学性能的关系。
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