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【摘 要】:目的:研究痹痛定胶囊对大鼠佐剂性关节炎病变的影响。方法:选择Freund's完全佐剂复制佐剂性关节炎AA大鼠模型,观察痹痛定胶囊对大鼠右足跖肿胀度、大鼠血清PGE2、CRP值的影响。结果:痹痛定胶囊对大鼠足跖肿胀有明显的抑制作用,此作用较正清风痛宁强;能显著降低大鼠血清CRP、PGE2值,与正清风痛宁组比较,差异不显著(P>0.05)。结论:痹痛定胶囊对关节炎具有治疗作用,其作用机理与抑制血清CRP、PGE2的产生有关。
【关键词】:痹痛定胶囊佐剂性关节炎实验研究
【中图分类号】R684.3;R944.5【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2008)08-0038-03
痹痛定胶囊是以临床经验方为基础,采用现代中药制备工艺研制的中药复方有效成分提取物制剂,具有益气、祛风、通络、止痛之功,用于治疗类风湿性关节炎疗效较好。为进一步验证其抗炎作用,特开展痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的实验研究,现将实验结果总结如下。
1 材料
1.1 动物:WISTAR大鼠60只,体重200±20g,雌雄各半;饲料:固体颗粒鼠饲料。由同济医学院实验动物学部提供。
1.2 药物:试验组:痹痛定胶囊[痹痛定胶囊由黄芪、清风藤、全蝎组成,剂量:3.56g/粒按生药计,武汉市中医医院药剂科提供,批准文号:鄂药制字号:(2001)第BZ05-039号]。对照组:正清风痛宁片(湖南正清药业有限公司提供,批准文号:国药准字Z20010174,批号:0501104)。
1.3 试剂:卡介苗素,由上海生物制品研究所提供,批号:200404001;液体石蜡油,由武汉中南化工试剂有限公司提供,批号:20040421;羊毛脂,上海三蒲化工有限公司,批号:20040107。大鼠CRP试剂盒ELS法,进口分装;大鼠PGE2试剂盒ELS法,进口分装;由上海森雄生物制品有限公司提供,购自美国公司。
1.4 仪器:2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置,自制。ELX800酶标仪美国。
2 方法
2.1 模型复制:取冻干卡介苗素1支50mg, 80℃、1h灭活,混入灭菌液体石蜡油和羊毛脂21的混合物10ml中,制成Freund's完全佐剂。取体重200±20g大鼠,以Freund's完全佐剂在每鼠右后足跖皮内注射0.05ml致炎,复制佐剂性关节炎AA大鼠模型。造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻,食欲下降,皮毛失去光泽,关节肿胀,跛行,耳廓充血,皮下结节表现,结合上述造模成功的筛选指针,可确定动物造模成功。
2.2 分组:取大鼠60只,体重200±20g,雌雄各半,随机分为6组,取其中的1组大鼠作正常对照。具体分组情况如下:
A组:正常对照组简称:正常组;
B组:生理盐水对照组简称:模型组;
C组:正清风痛宁对照组简称:正清风痛宁组;
D组:痹痛定胶囊大剂量治疗组简称:大剂量组;
E组:痹痛定胶囊中剂量治疗组简称:中剂量组;
F组:痹痛定胶囊小剂量治疗组简称:小剂量组。
2.3 给药剂量:
2.3.1痹痛定胶囊:成人常用量:口服,3次/日, 3粒/次,共计2.7g按生药量计32g。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算,确定大鼠服药剂量32gkg-1.d-1(中剂量;在此基础上,将剂量×1/2,即16g/kg/d小剂量;将剂量×2,即64gkg-1.d-1大剂量。取胶囊内药粉,加蒸馏水配成浑悬液,浓度为0.8g/ml,1.6g/ml,3.2g/ml。
2.3.2 正清风痛宁片剂:成人常用量:口服,每日60~120mg。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算,确定大鼠服药剂量为60mgkg-1.d-1。取正清风痛宁片剂,研磨成细粉后加入双蒸水,配置成混悬液,浓度为3mg/ml。
2.4 试验方法:
2.4.1取体重200±20g大鼠,雌雄各半,随机分为6组,其中5组分别灌胃给药,每日1次,连续5天,第6天,分别测量大鼠右足跖容积后,复制AA模型,1小时后,再次给药1次,于造模后第3、6、18、24h各再次测定大鼠右足跖容积,以造模前后容积之差值为肿胀程度。另1组大鼠不作处理,作正常对照。
2.4.2:取造模1周后的动物,分别按组灌胃给药,给药体积4ml/200g,每日1次。给药21日后,以戊巴比妥钠麻醉大鼠,股动脉放血处死动物。取血进行相应检测。
2.5 血清指针检测:取血5ml,静置30分钟,放入冷冻离心机,2500转/分离心15分钟,取血清,按试剂盒说明书要求,检测血清CRP、PGE2含量。
3 统计方法
方差分析,组间比较Q检验。
4 结果
4.1造模后大鼠体征变化 造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻,食欲下降,皮毛失去光泽,关节肿胀,跛行,耳廓充血,皮下结节表现。
4.2 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响(结果见表1)注射佐剂造模后,大鼠出现明显炎性反应,右后足跖逐渐肿胀,于造模后18h达到高峰,随后开始下降。痹痛定胶囊各剂量组对(AA)大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用,与正清风痛宁组比较,差异显著(P<0.05)。提示,痹痛定胶囊对(AA)大鼠原发性关节炎具有抑制作用,此作用较正清风痛宁强。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200808/mzmj20080816-1-l.jpg)
4.3 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响(结果见表2)。大鼠造模后,血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值显著升高。痹痛定胶囊能显著降低血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值,与正清风痛宁组比较,差异不显著(P>0.05)。提示,痹痛定胶囊能明显改善(AA)大鼠症状,调节免疫状态,抑制细胞免疫因子生成,对关节炎具有治疗作用,对血清PGE2、CRP值的抑制作用与正清风痛宁相似。
5 讨论
滑膜炎症是类风湿性关节炎Rheumatoid arthritis,RA的重要病理过程,PGE2作为一种炎症介质在滑膜炎症病理过程中发挥着重要作用。PGE2可引起小血管扩张,降低血管张力,增强毛细血管通透性,诱导血小板聚集和血栓素TXA2合成,下调I胶原c I和上调Ⅱ胶原c II的合成,提高痛觉敏感性,并具有致热原作用,从而引起炎症反应性水肿、渗出、局部红斑和充血而发红、疼痛和发热。降低PGE2的表达将减轻局部的炎症反应。CRP是一种急性期反应蛋白,主要由TNF、II-l和IL-6及前例腺素能介导CRP的生成,正常人血中CRP含量很低一般<10mg/L,在急性炎症时可在6~12h内上升达100倍,并在治疗后或缓解期迅速下降,RA活动期由于上述介导CRP生成的活性物质增多,导致CRP浓度水平升高所致。大鼠佐剂性关节炎模型,是一种免疫性炎症模型,普遍用于抗类风湿类药物的研究。其病变分为原发性和继发性两种:原发病变表现为非特异性炎症,主要表现为致炎局部的炎症反应,致炎18~24h后肿胀达峰值,持续3d后减轻;继发病变于致炎后15d左右出现病理组织学特征,滑模增生,淋巴细胞、单核巨噬细胞浸润及关节软骨组织破坏等,其组织病理及血液中的变化与人类RA中早期相似1,因此本实验借助佐剂性关节炎大鼠动物模型,探讨痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的机理。本次实验结果显示:痹痛定胶囊各剂量组对(AA)大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用,能显著降低血清CRP、PGE2值。以上结果提示:痹痛定胶囊是治疗RA的有效药物,不仅能抑制原发炎症,对(AA)大鼠的继发炎症也有抑制作用。其作用与正清风痛宁相似,作用机理与抑制血清CRP、PGE2的产生有关。
参考文献
[1]刘心连,刘成贵.穴位注射治疗类风湿性关节炎及其对为细胞免疫功能的影响.中国针灸,1994,1421~4.
(收稿日期:2008.6.13)
【关键词】:痹痛定胶囊佐剂性关节炎实验研究
【中图分类号】R684.3;R944.5【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2008)08-0038-03
痹痛定胶囊是以临床经验方为基础,采用现代中药制备工艺研制的中药复方有效成分提取物制剂,具有益气、祛风、通络、止痛之功,用于治疗类风湿性关节炎疗效较好。为进一步验证其抗炎作用,特开展痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的实验研究,现将实验结果总结如下。
1 材料
1.1 动物:WISTAR大鼠60只,体重200±20g,雌雄各半;饲料:固体颗粒鼠饲料。由同济医学院实验动物学部提供。
1.2 药物:试验组:痹痛定胶囊[痹痛定胶囊由黄芪、清风藤、全蝎组成,剂量:3.56g/粒按生药计,武汉市中医医院药剂科提供,批准文号:鄂药制字号:(2001)第BZ05-039号]。对照组:正清风痛宁片(湖南正清药业有限公司提供,批准文号:国药准字Z20010174,批号:0501104)。
1.3 试剂:卡介苗素,由上海生物制品研究所提供,批号:200404001;液体石蜡油,由武汉中南化工试剂有限公司提供,批号:20040421;羊毛脂,上海三蒲化工有限公司,批号:20040107。大鼠CRP试剂盒ELS法,进口分装;大鼠PGE2试剂盒ELS法,进口分装;由上海森雄生物制品有限公司提供,购自美国公司。
1.4 仪器:2ml毛细玻璃管排水法测定体积装置,自制。ELX800酶标仪美国。
2 方法
2.1 模型复制:取冻干卡介苗素1支50mg, 80℃、1h灭活,混入灭菌液体石蜡油和羊毛脂21的混合物10ml中,制成Freund's完全佐剂。取体重200±20g大鼠,以Freund's完全佐剂在每鼠右后足跖皮内注射0.05ml致炎,复制佐剂性关节炎AA大鼠模型。造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻,食欲下降,皮毛失去光泽,关节肿胀,跛行,耳廓充血,皮下结节表现,结合上述造模成功的筛选指针,可确定动物造模成功。
2.2 分组:取大鼠60只,体重200±20g,雌雄各半,随机分为6组,取其中的1组大鼠作正常对照。具体分组情况如下:
A组:正常对照组简称:正常组;
B组:生理盐水对照组简称:模型组;
C组:正清风痛宁对照组简称:正清风痛宁组;
D组:痹痛定胶囊大剂量治疗组简称:大剂量组;
E组:痹痛定胶囊中剂量治疗组简称:中剂量组;
F组:痹痛定胶囊小剂量治疗组简称:小剂量组。
2.3 给药剂量:
2.3.1痹痛定胶囊:成人常用量:口服,3次/日, 3粒/次,共计2.7g按生药量计32g。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算,确定大鼠服药剂量32gkg-1.d-1(中剂量;在此基础上,将剂量×1/2,即16g/kg/d小剂量;将剂量×2,即64gkg-1.d-1大剂量。取胶囊内药粉,加蒸馏水配成浑悬液,浓度为0.8g/ml,1.6g/ml,3.2g/ml。
2.3.2 正清风痛宁片剂:成人常用量:口服,每日60~120mg。根据实验大鼠与人的体表面积比例系数换算,确定大鼠服药剂量为60mgkg-1.d-1。取正清风痛宁片剂,研磨成细粉后加入双蒸水,配置成混悬液,浓度为3mg/ml。
2.4 试验方法:
2.4.1取体重200±20g大鼠,雌雄各半,随机分为6组,其中5组分别灌胃给药,每日1次,连续5天,第6天,分别测量大鼠右足跖容积后,复制AA模型,1小时后,再次给药1次,于造模后第3、6、18、24h各再次测定大鼠右足跖容积,以造模前后容积之差值为肿胀程度。另1组大鼠不作处理,作正常对照。
2.4.2:取造模1周后的动物,分别按组灌胃给药,给药体积4ml/200g,每日1次。给药21日后,以戊巴比妥钠麻醉大鼠,股动脉放血处死动物。取血进行相应检测。
2.5 血清指针检测:取血5ml,静置30分钟,放入冷冻离心机,2500转/分离心15分钟,取血清,按试剂盒说明书要求,检测血清CRP、PGE2含量。
3 统计方法
方差分析,组间比较Q检验。
4 结果
4.1造模后大鼠体征变化 造模后大鼠均出现不同程度的体重减轻,食欲下降,皮毛失去光泽,关节肿胀,跛行,耳廓充血,皮下结节表现。
4.2 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响(结果见表1)注射佐剂造模后,大鼠出现明显炎性反应,右后足跖逐渐肿胀,于造模后18h达到高峰,随后开始下降。痹痛定胶囊各剂量组对(AA)大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用,与正清风痛宁组比较,差异显著(P<0.05)。提示,痹痛定胶囊对(AA)大鼠原发性关节炎具有抑制作用,此作用较正清风痛宁强。
![](https://www.soolun.com/img/pic.php?url=http://img.resource.qikan.cn/qkimages/mzmj/mzmj200808/mzmj20080816-1-l.jpg)
4.3 对大鼠佐剂性关节炎原发病变的影响(结果见表2)。大鼠造模后,血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值显著升高。痹痛定胶囊能显著降低血清IL-1β、TNF-α、CRP、PGE2值,与正清风痛宁组比较,差异不显著(P>0.05)。提示,痹痛定胶囊能明显改善(AA)大鼠症状,调节免疫状态,抑制细胞免疫因子生成,对关节炎具有治疗作用,对血清PGE2、CRP值的抑制作用与正清风痛宁相似。
5 讨论
滑膜炎症是类风湿性关节炎Rheumatoid arthritis,RA的重要病理过程,PGE2作为一种炎症介质在滑膜炎症病理过程中发挥着重要作用。PGE2可引起小血管扩张,降低血管张力,增强毛细血管通透性,诱导血小板聚集和血栓素TXA2合成,下调I胶原c I和上调Ⅱ胶原c II的合成,提高痛觉敏感性,并具有致热原作用,从而引起炎症反应性水肿、渗出、局部红斑和充血而发红、疼痛和发热。降低PGE2的表达将减轻局部的炎症反应。CRP是一种急性期反应蛋白,主要由TNF、II-l和IL-6及前例腺素能介导CRP的生成,正常人血中CRP含量很低一般<10mg/L,在急性炎症时可在6~12h内上升达100倍,并在治疗后或缓解期迅速下降,RA活动期由于上述介导CRP生成的活性物质增多,导致CRP浓度水平升高所致。大鼠佐剂性关节炎模型,是一种免疫性炎症模型,普遍用于抗类风湿类药物的研究。其病变分为原发性和继发性两种:原发病变表现为非特异性炎症,主要表现为致炎局部的炎症反应,致炎18~24h后肿胀达峰值,持续3d后减轻;继发病变于致炎后15d左右出现病理组织学特征,滑模增生,淋巴细胞、单核巨噬细胞浸润及关节软骨组织破坏等,其组织病理及血液中的变化与人类RA中早期相似1,因此本实验借助佐剂性关节炎大鼠动物模型,探讨痹痛定胶囊治疗类风湿性关节的机理。本次实验结果显示:痹痛定胶囊各剂量组对(AA)大鼠原发性足跖肿胀均有明显的抑制作用,能显著降低血清CRP、PGE2值。以上结果提示:痹痛定胶囊是治疗RA的有效药物,不仅能抑制原发炎症,对(AA)大鼠的继发炎症也有抑制作用。其作用与正清风痛宁相似,作用机理与抑制血清CRP、PGE2的产生有关。
参考文献
[1]刘心连,刘成贵.穴位注射治疗类风湿性关节炎及其对为细胞免疫功能的影响.中国针灸,1994,1421~4.
(收稿日期:2008.6.13)