【摘 要】
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目的 探讨壮药双路通脑方对缺血-再灌注(I/R)脑损伤大鼠神经元细胞自噬和凋亡的影响及潜在机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组,模型对照组,小、中、大剂量壮药双路通脑方组,大剂量壮药双路通脑方+AMPK激活剂AICAR组,每组18只。按照分组给予不同的药物干预7d后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型。再灌注24h后,评估大鼠神经功能缺损的程度;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体
【基金项目】
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国家自然科学基金资助项目(81874453); 广西壮族自治区中医药管理局自筹经费科研课题(20210360,20210506); 广西科技厅自然科学基金(2021JJB140540); 广西中医药重点学科中医脑病学(GZXK-Z-20-14);
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目的 探讨壮药双路通脑方对缺血-再灌注(I/R)脑损伤大鼠神经元细胞自噬和凋亡的影响及潜在机制。方法 SD大鼠随机分为假手术组,模型对照组,小、中、大剂量壮药双路通脑方组,大剂量壮药双路通脑方+AMPK激活剂AICAR组,每组18只。按照分组给予不同的药物干预7d后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞模型。再灌注24h后,评估大鼠神经功能缺损的程度;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色观察脑梗死体积;苏木精-伊红(HE)染色观察缺血半影区海马CA1区神经元形态学变化;TUNEL染色检测神经元凋亡;透射电子显微镜观察自噬小体的形成;免疫荧光(IF)染色检测微管相关蛋白1轻链3(LC-3)-Ⅱ的表达;Westernblot检测自噬标志基因Beclin-1、LC3A/B、p62及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、Unc-51样激酶1(ULK1)及其磷酸化蛋白的表达。结果与假手术组比较,模型对照组神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、自噬小体数量、LC3-Ⅱ阳性表达、海马组织Beclin-1蛋白水平和LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK、p-ULK1(S317)/ULK1比值显著升高,p62蛋白水平和p-mTOR/mTOR、p-ULK1(S757)/ULK1比值显著降低(P<0.05);与模型对照组比较,小、中、大剂量壮药双路通脑方组大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积、神经元凋亡率、自噬小体数量、LC3-Ⅱ阳性表达、海马组织Beclin-1蛋白水平和LC3-II/LC3-I、p-AMPK/AMPK、p-ULK1(S317)/ULK1比值显著降低,p62蛋白水平和p-mTOR/mTOR、p-ULK1(S757)/ULK1比值显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性;AICAR可明显减弱大剂量壮药双路通脑方对脑I/R大鼠神经元自噬和凋亡的抑制作用。结论 壮药双路通脑方可能通过调控AMPK/mTOR信号通路,抑制神经元的过度自噬,减少神经元凋亡,进而对脑I/R大鼠发挥神经保护作用。
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