【摘 要】
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目的:在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法:将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌
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目的:在成功构建猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B的基础上,研究猪带绦虫TSO45W-4B基因在长双歧杆菌中的表达情况。方法:将猪带绦虫大肠杆菌-双歧杆菌穿梭表达质粒p GEX-TSO45W-4B电转化入长双歧杆菌,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-d-thiogalactoside,IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)和Western blot分析表达情况。结果:酶切、聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)和测序证实,重组质粒p GEX-TSO45W-4B成功转入长双歧杆菌。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子质量(Mr)约为40 k D,经谷胱甘肽转移酶(glutathione S-transferase,GST)亲和层析后可获得纯度为85%以上的重组蛋白。Western blot显示,重组蛋白能被兔抗TSO45W-4B血清、囊虫病猪血清和囊虫病患者血清所识别。结论:猪带绦虫TSO45W-4B基因能够在长双歧杆菌中获得表达,表达的重组蛋白具有特异的抗原性。
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