【摘 要】
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以冈比亚按蚊防御素（Defensin）氨基酸序列为种子序列,在致倦库蚊EST库中查找相似序列。通过RT-PCR技术,克隆获得致倦库蚊防御素编码序列。将致倦库蚊防御素成熟肽基因片段定向
【机 构】
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贵阳医学院医学生物技术教研室,贵阳医学院生物学教研室
【基金项目】
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贵州省科学技术基金项目(黔科合J字(2006)2077号);贵州省人才领导小组基金项目(Q2007-2)
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以冈比亚按蚊防御素（Defensin）氨基酸序列为种子序列,在致倦库蚊EST库中查找相似序列。通过RT-PCR技术,克隆获得致倦库蚊防御素编码序列。将致倦库蚊防御素成熟肽基因片段定向克隆至原核表达载体pET32a（＋）,构建致倦库蚊防御素重组表达质粒pET32a-DEF,导入大肠埃希菌Rosetta中表达,并比较不同IPTG浓度、不同诱导时间、不同诱导温度对重组基因表达的影响,以确定最佳诱导表达条件,重组蛋白经His-镍蛋白纯化柱纯化。结果表明,致倦库蚊防御素基因编码区全长300bp,编码99个氨基酸。p
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