【摘 要】
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目的 利用酵母双杂合体系筛选HBV前S1结合蛋白,进一步探讨前S1蛋白在HBV感染中的作用.方法 PCR扩增HBV前S1基因序列,根据酵母双杂合体系构建饵质粒pAS2-1-preS1,并测定序列;
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目的 利用酵母双杂合体系筛选HBV前S1结合蛋白,进一步探讨前S1蛋白在HBV感染中的作用.方法 PCR扩增HBV前S1基因序列,根据酵母双杂合体系构建饵质粒pAS2-1-preS1,并测定序列;饵质粒转化入酵母菌AH109,Western印迹法证实前S1-BD融合蛋白在酵母细胞中的正确表达.pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞,通过选择性培养及β-半乳糖苷酶活性测定筛选阳性菌落,分离实验排除假阳性克隆,扩增阳性克隆的目的基因并测定序列,查询其同源序列,行交合实验进一步证实目的蛋白同前S1蛋白在酵母细胞中能否特异性结合.结果 成功构建pAS2-1-preS1饵质粒,Western印迹法证实转化饵质粒的酵母细胞能正确表达前S1-BD融合蛋白,pAS2-1-preS1及正常成人肝细胞cDNA文库共转化酵母细胞后,选择性培养出101个菌落,经β-半乳糖苷酶活性测定及分离实验后筛选出1个阳性克隆,其cDNA插入片段与丝裂原活化蛋白激酶-胞外信号调节蛋白激酶(MAPK-ERK)激酶1(MEK1)基因高度同源.交合实验证实MEK1同前S1蛋白在酵母细胞中可特异性结合.结论 酵母双杂合体系证实MEK1可能是一个前S1结合蛋白.
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