目的:建立孕马尿中主要结合雌激素的定性定量方法。方法:孕马尿样品通过HPD-400大孔树脂固相萃取处理后,采用银化硅胶薄层色谱法快速鉴别孕马尿中雌酮硫酸钠、马烯雌酮硫酸钠、17α-二氢马烯雌酮硫酸钠3种主要结合雌激素;采用merck整体化柱分离,测定样品中3种主要结合雌激素含量。结果:薄层色谱中,供试品色谱与对照品色谱在相应位置显相同颜色的条带,条带清晰,分离效果好,阴性无干扰;建立的含量快速测定方法,3种主要结合雌激素在10min内可达到完全分离,浓度分别为0.8～6.4μg·mL-1(r=0.9996),0.4～3.2μg·mL-1(r=0.9998),0.3～2.4μg.mL-1(r=0.9998)线性关系良好,平均回收率分别为96.1%,96.5%,98.2%。结论:该方法快速、准确、可靠,适合孕马尿中主要结合雌激素的定性、定量检测,对于孕马尿品质评价具有参考价值。