牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定

来源 :应用与环境生物学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：aileenliuwei

【摘要】

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肠激酶（enterokinase，EK）是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶．根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA，测序正确后将其插入甲醇酵母分泌

【作者】

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李德华苟业华胡海洋徐琦刘忠荣吴洽庆余晓东

【机构】

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重庆师范大学生命科学院,成都地奥制药集团有限公司,四川大学化工学院,中国科学院成都生物研究所

【出处】

：

应用与环境生物学报

【发表日期】

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2006年6期

【关键词】

：

肠激酶(enterokinase EK) 甲醇酵母(Pichia pastoris) 高密度发酵 enterokinase Pichia pastoris

【基金项目】

：

国家“863”计划项目（2001AA215401）

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肠激酶（enterokinase，EK）是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶．根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA，测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA，得到重组质粒pPICZαA／EKL，重组载体经线性化后转化Pichia pastoris SMD1168H，筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌．分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL（recombinant enterokinase light chain，rEKL）纯化、N端序列测定

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