【摘 要】
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目的 建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析方法.方法 以CCP重组抗原和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和Eu3+记抗体,如
【机 构】
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江苏省无锡市人民医院医学检验科,江苏省无锡市人民医院风湿免疫科
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目的 建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体的时间分辨荧光免疫分析方法.方法 以CCP重组抗原和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和Eu3+记抗体,如果样本中存在抗CCP抗体,则形成CCP重组抗原-抗CCP抗体-Eu3+标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中抗CCP抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(TRFIA)法检测抗CCP抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对32例阳性血清标本分别利用TRFIA及酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗CCP抗体,分析其相关性;收集50名健康献血者,32例系统性红斑狼疮,26例干燥综合征,10例硬皮病,20例混合性结缔组织病,18例多发性硬化症,利用TRFIA检测其血清中的抗CCP抗体,计算临床特异度.TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用Mc Nemar检验.结果 TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(20份)精密度分别为2%、3%和4%,批间(8份)精密度分别为3%、4%和7%;平均回收率为101%;方法的灵敏度为1.0 U/ml;TRFIA法检测健康献血者、系统性红斑狼疮、干燥综合征、硬皮病、混合性结缔组织病及多发性硬化症患者血清中抗CCP抗体,临床特异度分别为98%、97%、96%、100%、95%、100%;2种方法检测的相关系数为0.989;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好.结论 首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的抗CCP抗体,对早期诊断RA及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用.
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