【摘 要】
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将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒.设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动
【机 构】
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扬州大学农业部畜禽传染病学重点开放实验室,扬州,225009德国Friedrich-L(o)ffler研究所国家动物病毒病研究中心分子生物学实验室,瑞姆斯岛,德国;
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将鹅源新城疫病毒ZJI株全基因组cDNA克隆通过酶切切下包含T7启动子区域和转录载体的片段,将其自身环化后获得约6.5kb的质粒.设计引物,利用基因定点突变技术,在此质粒上T7启动子与NDV Leader序列之间突变插入额外的3个G碱基,将此突变最终引入到原基因组cDNA克隆中.应用RT-PCR技术从尿囊液中扩增NDV基因组F/HN基因区域部分片段,利用限制性内切酶BsmBI将扩增片段连接,最终将原cDNA克隆中相应片段替换下.测序结果表明,原基因组cDNA克隆中特定位置碱基插入突变成功,F/HN基因区域碱基突变均得以纠正.以上cDNA克隆的修饰与替换为该毒株的反向遗传研究打下了基础.
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