p21对肝癌细胞中survivin转录的影响及调控机制的探讨

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目的研究细胞周期依赖性激酶抑制蛋白p21对人肝癌细胞survivin转录抑制的调控作用,并探讨其相应机制。方法使用多柔比星处理人肝癌细胞株HepG2,采用脂质体法将质粒pEGFP-C2-p21导入HepG2细胞,用G418筛选转染后的HepG2-p21和HepG2-pEGFP细胞;采用实时定量聚合酶链反应(RQ—PCR)检测p21、p53和survivin的mRNA表达;采用流式细胞仪分析转染后细胞周期的变化;采用逆转录聚合酶链反应(RT—PCR)检测转染后E2F-1和p300的mRNA表达。结果经多柔比星处理后、HepG2细胞中p21和p53 mRNA的表达先增高,然后逐渐降低;survivin mRNA的表达则相反。转染后,HepG2-p21细胞中p21 mRNA的表达明显增高,分别为HepG2和HepG2-p EGFP细胞的2100.1倍和980.9倍;surivin mRNA的表达却明显降低,分别为HepG2和HepG2-pEGFP细胞的0.5%和0.6%;p53 mRNA的表达差异无统计学意义?流式细胞仪检测显示,HepG2-p21细胞的细胞周期明显阻滞在G0/G1期。HepG2-p21细胞中E2F-1和p300 mRNA的表达水平分别为0.75±0.04和0.18±0.06,与HepG2和HepG2-pEGFP细胞比较,含量均明显减低(P〈0.05)。结论p21可能通过抑制survivin的转录调控因子E2F-1和p300 mRNA的表达,从而抑制细胞中survivin的表达,并导致细胞出现G0/G1期阻滞.

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