【摘 要】
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为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体p IRES,将构建的质粒p IRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光
【机 构】
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华南农业大学兽医学院,广东省农科院动物卫生研究所/广东省兽医公共卫生公共实验室,中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原微生物国家重点实验室
【基金项目】
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广东省重点实验室建设支撑项目(2012A0611 00006);广东省农业科学院院长基金(201530);广东省主体机构创新能力建设专项(2011);科技部农业科技成果转化资金(2013GBZE000352)
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为探讨携带FMDV DNA疫苗重组沙门氏菌口服免疫可行性,PCR扩增O型FMDV主要抗原基因VP1,并连接到真核表达载体p IRES,将构建的质粒p IRES-VP1体外转染BHK-21细胞,间接免疫荧光检测VP1基因的表达。通过氯化钙转化法将重组质粒p IRES-VP1转入减毒鼠伤寒沙门氏菌2266,构建2266(p IRES-VP1)重组菌,并以108、109、1010CFU的剂量口服免疫小鼠,2周后以相同剂量加强免疫,以研究重组菌在小鼠体内的稳定性及安全性,并通过将重组菌进行体外传代,研究重组质粒在体外的稳定性。研究结果表明:108、109CFU剂量免疫小鼠成活率为100%,1010CFU剂量口服小鼠出现扎堆现象,且行动迟缓。重组菌体外连传8代以及免疫小鼠后从脾脏和肝脏分离鉴定表明,重组菌2266(p IRES-VP1)在体内和体外均具有较好的安全性和稳定性。
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