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【摘要】目的:建立通天口服液中马兜铃酸A的含量测定法。方法:色谱柱为DiamonsilTM C18 (5μm,4.6×250mm);流动相为0.02%十二烷基硫酸钠溶液-乙腈(50:50),用磷酸调pH值为2.0;检测波长为390nm。结果:在0.817-8.168ng进样范围内,马兜铃酸A的峰面积与进样量线性关系良好(r=0. 99973)。结论:该法可用于通天口服液中马兜铃酸A的含量检测。
【关键词】通天口服液;马兜铃酸A;HPLC法
通天口服液处方中的细辛药材含有肾毒性成分马兜铃酸A,为保证产品的安全性,参考文献方法[1]-[3]建立了通天口服液中马兜铃酸的含量测定方法。
1 仪器与试药
仪器:Agilent 1100 series高效液相色谱仪包括四元泵, 柱温箱,自动进样器,二级管阵列检测器。马兜铃酸A对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号为0746-200103;乙腈为色谱纯由美国Fisher公司提供;其余均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备:取本品20ml,加1mol/L氢氧化钠溶液调pH=12~13,加乙醚萃取3次,每次20ml,弃去乙醚溶液,水溶液加5mol/L盐酸溶液调pH=2~3,加乙醚萃取4次,每次15ml,合并乙醚溶液,水浴蒸干,残渣加甲醇分次溶解,转入5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,0.45μm滤膜滤过作为供试品溶液。
2.2 色谱条件色谱柱: DiamonsilTM C18 (5μm,4.6×250mm);流动相的选择: 0.02%十二烷基硫酸钠溶液-乙腈(50:50),用磷酸调pH值为2.0;流速:1.0mL·min-1;检测波长:390nm;进样量:10μl。
2.3线性关系考察:分别精密称定马兜铃酸A对照品适量,加甲醇溶解,配制成浓度为0.4084μg/ml的马兜铃酸A对照品溶液2、5、10、15、20μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,绘制标准曲线,回归方程为:Y=2.02454589X+0.0674531,r=0.99973。结果表明马兜铃酸A进样量在0.817-8.168ng范围内有良好的线性关系。
2.4精密度试验:取浓度为0.4084μg/ml的马兜铃酸A对照品溶液,进样5次,进样量为10μl,相对偏差RSD为1.0%(n=5)。结果表明,精密度良好。
2.6最低检测限:按信噪比S/N计算,马兜铃酸A的最低检测限为0.204ng。
2.7药材及6批通天口服液样品的测定:分别取我厂一直使用产于辽宁的汉城细辛、及六批通天口服液样品,照拟订的色谱条件下测定,结果表明产于辽宁的汉城细辛、通天口服液中均未检出马兜铃酸A。
3 讨论
筆者选择3种波长(254nm、317nm、390nm)对马兜铃酸A、汉城细辛药材、通天口服液样品及阴性对照样品进行扫描,结果发现390nm作为测定波长时,无干扰。
参考文献
[1] Xie Zhao-ming,Li Shun-xiang.Determination of aristolochic acid A in herba asari by HPLC.中南药学2003.6.1
[2] 英锡相,袁昌鲁,曲贤广等 11种中药材及3种中成药马兜铃酸的含量测定.辽宁中医杂志 2003,30(5):404
[3] 谢昭明,李顺祥,廖汉成 HPLC法测定细辛药材中马兜铃酸A的含量.中南药学 2003,1(3):164
作者简介:彭涛,男,(1973.4-),重庆云阳,高级工程师,主要从事中药新药开发和质量标准研究工作
【关键词】通天口服液;马兜铃酸A;HPLC法
通天口服液处方中的细辛药材含有肾毒性成分马兜铃酸A,为保证产品的安全性,参考文献方法[1]-[3]建立了通天口服液中马兜铃酸的含量测定方法。
1 仪器与试药
仪器:Agilent 1100 series高效液相色谱仪包括四元泵, 柱温箱,自动进样器,二级管阵列检测器。马兜铃酸A对照品由中国药品生物制品检定所提供,批号为0746-200103;乙腈为色谱纯由美国Fisher公司提供;其余均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备:取本品20ml,加1mol/L氢氧化钠溶液调pH=12~13,加乙醚萃取3次,每次20ml,弃去乙醚溶液,水溶液加5mol/L盐酸溶液调pH=2~3,加乙醚萃取4次,每次15ml,合并乙醚溶液,水浴蒸干,残渣加甲醇分次溶解,转入5ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,0.45μm滤膜滤过作为供试品溶液。
2.2 色谱条件色谱柱: DiamonsilTM C18 (5μm,4.6×250mm);流动相的选择: 0.02%十二烷基硫酸钠溶液-乙腈(50:50),用磷酸调pH值为2.0;流速:1.0mL·min-1;检测波长:390nm;进样量:10μl。
2.3线性关系考察:分别精密称定马兜铃酸A对照品适量,加甲醇溶解,配制成浓度为0.4084μg/ml的马兜铃酸A对照品溶液2、5、10、15、20μl注入高效液相色谱仪,测定峰面积,绘制标准曲线,回归方程为:Y=2.02454589X+0.0674531,r=0.99973。结果表明马兜铃酸A进样量在0.817-8.168ng范围内有良好的线性关系。
2.4精密度试验:取浓度为0.4084μg/ml的马兜铃酸A对照品溶液,进样5次,进样量为10μl,相对偏差RSD为1.0%(n=5)。结果表明,精密度良好。
2.6最低检测限:按信噪比S/N计算,马兜铃酸A的最低检测限为0.204ng。
2.7药材及6批通天口服液样品的测定:分别取我厂一直使用产于辽宁的汉城细辛、及六批通天口服液样品,照拟订的色谱条件下测定,结果表明产于辽宁的汉城细辛、通天口服液中均未检出马兜铃酸A。
3 讨论
筆者选择3种波长(254nm、317nm、390nm)对马兜铃酸A、汉城细辛药材、通天口服液样品及阴性对照样品进行扫描,结果发现390nm作为测定波长时,无干扰。
参考文献
[1] Xie Zhao-ming,Li Shun-xiang.Determination of aristolochic acid A in herba asari by HPLC.中南药学2003.6.1
[2] 英锡相,袁昌鲁,曲贤广等 11种中药材及3种中成药马兜铃酸的含量测定.辽宁中医杂志 2003,30(5):404
[3] 谢昭明,李顺祥,廖汉成 HPLC法测定细辛药材中马兜铃酸A的含量.中南药学 2003,1(3):164
作者简介:彭涛,男,(1973.4-),重庆云阳,高级工程师,主要从事中药新药开发和质量标准研究工作