【摘 要】
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目的 构建一种拟杆菌Bacteroides coprocola(BC)β-葡萄糖苷酶基因的原核表达载体,并纯化该 β-葡萄糖苷酶,检测其水解不同底物的能力.方法 以NCBI数据库中提供的BC菌 β-葡
【机 构】
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军事科学院军事医学研究院军事认知与脑科学研究所,北京,100850;军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所,北京,100850
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目的 构建一种拟杆菌Bacteroides coprocola(BC)β-葡萄糖苷酶基因的原核表达载体,并纯化该 β-葡萄糖苷酶,检测其水解不同底物的能力.方法 以NCBI数据库中提供的BC菌 β-葡萄糖苷酶基因序列为参考,合成出该基因的全长序列,测序正确后插入到含GST基因的原核表达载体pGEX-4T-1中;以IPTG诱导表达,并经谷胱甘肽琼脂糖珠纯化融合蛋白;SDS-PAGE和Western印迹检测 β-葡萄糖苷酶基因的表达,并通过不同底物检测其活性及比较各法的优劣.结果 PCR扩增结果与双酶切实验表明,原核表达载体构建成功;Western印迹结果显示,β-葡萄糖苷酶基因在大肠杆菌中特异表达;酶活性实验表明,该菌 β-葡萄糖苷酶在对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(4′-nitrophenyl-beta-D-glucopyranoside,pNPG)和京尼平苷(geniposide)中均有活性,且用pNPG作为底物测定的活性结果更可靠.结论 用两种底物成功检测出纯化的BC菌 β-葡萄糖苷酶的活性,为进一步研究其功能奠定了基础.
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