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目的：构建携带let-7a基因的真核表达载体，建立稳定转染该质粒的尤文肉瘤（Ewing’ssarcoma，ES）细胞株A673／let-7a、sK—ES-1／let-7a。方法：通过Gateway克隆技术，扩增attBl-K—eGFP—let-7a-1-attB2片段，与pDONR221进行BP重组反应产生入门克隆，再与母载体——pLV．Des2d．P／neo进行LR重组反应，生成目的质粒——pLV．Des2d．P／neo—EFlA〉eGFP／let-7a；通过PCR及测序验证目的质粒；将携带let-7a