【摘 要】
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目的采用荧光定量PCR法检测转染后可分泌表达人凝血因子ⅦCHO细胞株CHO-FⅦ中FⅦ基因的拷贝数。方法提取CHO-FⅦ和CHO-pcDNA3.1(空载体转染得到的细胞株)基因组DNA,分别以含
【机 构】
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中国医学科学院北京协和医学院输血研究所;
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目的采用荧光定量PCR法检测转染后可分泌表达人凝血因子ⅦCHO细胞株CHO-FⅦ中FⅦ基因的拷贝数。方法提取CHO-FⅦ和CHO-pcDNA3.1(空载体转染得到的细胞株)基因组DNA,分别以含有β-actin基因片段的质粒pMDT-actin和含有FⅦ全长cDNA序列的质粒pcDNA-FⅦ制作标准曲线,以CHO-FⅦ和CHO-pcDNA3.1的DNA为模板进行qPCR反应,计算出模板中细胞总数以及目的基因的拷贝数,得到每个细胞中目的基因的拷贝数,反应均在ABI Stepone Plus荧光定量PCR仪上进行。结果经检测模板中的细胞数为24 421±7 414,FⅦ基因的拷贝数49 455±3 502,每个细胞含有2个FⅦ基因拷贝,空载体转染得到的细胞株中并没有检测到FⅦ基因的存在。结论 FⅦ基因是以2个拷贝的比例整合到宿主染色体上的。
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