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目的：建立更简便的HPLC测定青霉素V钾片的含量。方法：采用C18柱，以水-乙腈-醋酸(65：35：1．6)为流动相，检测波长254nm。结果：青霉素V钾的浓度在1.5～3．5g·L^-1浓度范围内线性关系良好，r=0．9999，平均回收率99．9％，RSD=0．7％(n=5)。结论：HPLC测定青霉素V钾的含量，重现性好，专属性强。