【摘 要】
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目的探讨miR-22靶向NLRP3基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的影响。方法构建动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,分离大鼠原代冠状动脉内皮细胞,培养并鉴定,用同型半胱氨酸(HCY)对细胞共
【机 构】
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四川绵阳四0四医院心内科,重庆医科大学附属第一医院心内科
【基金项目】
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四川省绵阳市应用技术研究与开发项目(编号:15S-ZC-13);四川省卫计委课题(编号:17PJ019)
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目的探讨miR-22靶向NLRP3基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的影响。方法构建动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,分离大鼠原代冠状动脉内皮细胞,培养并鉴定,用同型半胱氨酸(HCY)对细胞共孵育24 h,进行冠心病应激,细胞分组。双荧光素酶报告基因验证miR-22和NLRP3的靶向关系。实时荧光定量PCR和Western blot检测心肌组织和各组细胞中miR-22和NLRP3、caspase-1水平。MTT法检测细胞活力。Hochest 33258染色检验细胞凋亡。ELISA检测白介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和IL-18炎症因子表达。结果与正常组大鼠相比,AS组大鼠血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLC)、Ca2+水平均明显升高(P<0.01);AS组大鼠心肌组织中miR-22水平显著降低,NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平显著上调(P<0.05)。NLRP3证实为miR-22的靶基因。与空白对照组细胞相比,miR-22 mimic组的NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平下降,细胞活力增强,细胞凋亡率下降,IL-1β、IL-6和IL-18炎症因子表达水平下调,IL-10表达水平上调(P<0.05);而miR-22 inhibitor组的NLRP3、caspase-1 mRNA及NLRP3、caspase-1蛋白水平上调,细胞活力降低,细胞凋亡率上升,IL-1β、IL-6和IL-18炎症因子表达水平上升,IL-10表达水平下降(P<0.05)。结论miR-22通过靶向抑制NLRP3基因,减少冠心病大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡及下调促炎症因子的表达,发挥对大鼠心肌微血管内皮细胞的保护作用。
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