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目的
探讨miRNA-370(miR-370)对肾癌细胞株ACHN和786-O中抑癌基因p21表达的调控作用以及对细胞生长的影响。
方法采用脂质体Lipofectamine 3000将已知的缺少人类基因同源性的dsRNA(对照组)和miR-370(实验组)分别转染ACHN和786-O细胞。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白印迹法分别检测p21 mRNA和蛋白的表达变化。流式细胞术鉴定细胞周期分布,采用MTS法和集落培养实验检测细胞活力和增殖能力。
结果在ACHN细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.33、3.68±0.62,两者比较差异有统计学意义(t=7.535,P<0.001)。在786-O细胞中,对照组和实验组中p21 mRNA的表达量分别为1.04±0.31、3.15±0.29,两者比较差异有统计学意义(t=9.975,P<0.001)。在两种细胞中,实验组p21 mRNA表达与对照组相比均上调。蛋白印迹法检测结果显示,p21蛋白表达水平增加,与p21 mRNA水平上调一致。ACHN和786-O细胞转染miR-370后,细胞周期被阻滞在G0~G1期。MTS结果显示,在ACHN细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为(113±30)、(53±17)个,两者比较差异有统计学意义(t=2.982,P=0.041)。在786-O细胞中,对照组和实验组中细胞形成的集落数分别为(106±27)、(50±16)个,两者比较差异有统计学意义(t=3.089,P=0.037)。在两种细胞中,实验组形成的集落数与对照组相比均减少。
结论miR-370可上调肾癌细胞中抑癌基因p21的表达,并抑制肾癌细胞的生长。