论文部分内容阅读
目的:探讨TGF-β1和IL-10对间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)分泌的细胞外囊泡(extracellular vesicle, EV)免疫调控功能的影响。方法:分离扩增人脐带来源的MSC,分别用TGF-β1和IL-10处理72 h,提取上清中MSC-EV。应用BCA法测定提取EV的总蛋白含量,在透射电子显微镜下观察EV的形态结构,流式细胞术检测EV表面标志物以鉴定MSC-EV。在ConA刺激后的人外周血单个核细胞(PBMNC)培养体系中,加入不同处理方法获得的EV,培养72 h后应用流式细胞仪检测PBMNC的凋亡,以及CD4+CD25+/CD127-调节T(Treg)细胞比例。应用CBA试剂盒和ELISA试剂盒检测培养PBMNC上清以及MSC-EV中IL2,IL4,IL6,IL10,IFN-γ,TNF-α,Th17A和TGF-β1的含量。结果:不同处理后的EV在透射电子显微镜下均呈现特征性杯口状膜样结构,均表达CD9,CD44,CD63及CD81。TGF-β1处理后MSC-EV促PBMNC凋亡的能力明显增强(P <0.01),不同处理后EV均可以提高Treg细胞比例。MSC-EV可以提高PBMNC培养上清中IL-10的含量,TGF-β1处理MSC-EV共培养后的PBMNC上清TGF-β1含量较未处理组明显降低(P <0.05)。TGF-β1处理后的MSC-EV样本IL-6含量显著升高,TGF-β1含量降低。结论:TGF-β1处理后MSC-EV的免疫调控功能发生改变,其意义值得进一步研究阐明。