【摘 要】
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为了研究类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells, FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理,利用改良消减杂交法以骨性关节炎(osteoar
【机 构】
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第四军医大学生物化学与分子生物学教研室,北京大学人民医院骨关节中心,;
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为了研究类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis, RA)滑膜细胞(fibroblast-like synovial cells, FLS)过度增殖和破坏软骨的分子机理,利用改良消减杂交法以骨性关节炎(osteoarthritis,OA)病人滑膜细胞为对照,筛选RA滑膜细胞中的高表达基因.将得到的基因片段克隆入质粒载体,通过反向点杂交排除假阳性克隆后,将阳性克隆进行核酸序列分析,最后用Northern杂交方法检测一些高表达基因在RA和OA病人滑膜细胞中的表达水平.结果显示,共分离到150个RA高表达基因片段,其中长于1 000 bp的片段占8%(12/150),长于400 bp的片段占36.7%(55/150),在大于400 bp的片段中,假阳性率为23.7%(13/55).在测序的18个片段中,已知基因有12个,其中包括IGF-1结合蛋白(IGFBP)特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶B等.新序列有6个,其中两个序列分别与Ring-box蛋白1和SON DNA结合蛋白同源.对IGFBP特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶B基因的Northern杂交分析显示,在RA病人滑膜细胞中,这些基因的表达水平高于OA病人滑膜细胞.这些结果提示,这种改良消减杂交法是一种简便有效的分离差异表达基因的方法;IGF-1结合蛋白特异性丝氨酸蛋白酶、层粘连蛋白受体和组织蛋白酶B等可能与RA滑膜细胞的过度增殖和对软骨的破坏相关.
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