【摘 要】
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目的:研究融合自杀基因CDglyTK联合前体药物对喉癌Hep-2细胞的杀伤效应.方法:构建质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CDglyTK,XhoⅠ/HindⅢ酶切鉴定,测序分析CDglyTK基因序列.电穿
【机 构】
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中南大学湘雅医院耳鼻咽喉科,中南大学分析测试中心
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目的:研究融合自杀基因CDglyTK联合前体药物对喉癌Hep-2细胞的杀伤效应.方法:构建质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CDglyTK,XhoⅠ/HindⅢ酶切鉴定,测序分析CDglyTK基因序列.电穿孔法将重组质粒转染Hep-2细胞,400 mg/L G418筛选14 d获得稳定表达CDglyTK基因的Hep-2细胞,RT-PCR及Western-blotting鉴定CDglyTK基因的表达.以转染空白载体pcDNA3.1(-)的Hep-2细胞为对照,MTT法观察5-FC、GCV、5-FC加 GCV对表达CDglyTK基因的Hep-2细胞生长的抑制作用.结果:酶切和基因测序分析证明重组质粒含完整的CD及TK基因,RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出707 bp的预期片段,Western-blotting检测到该基因表达的分子量为59 000的蛋白.表达CDglyTK基因的Hep-2细胞在5-FC、GCV、5-FC加 GCV干预下生长受到抑制,5-FC与GCV联合有更强的杀伤效应.结论:CDglyTK融合自杀基因可以成为基因治疗喉癌的有效方法.
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