采用TaqMan荧光标记探针技术原理,建立副结核分枝杆菌特异的实时荧光PCR快速检测鉴定方法并组装形成临床诊断试剂盒。试剂盒提供荧光PCR与样品核酸提取试剂,检测全程包括样品处理可在1d内完成。特异性试验结果表明,试剂盒对8株副结核分枝杆菌标准菌株的检测均呈典型阳性反应,对牛分枝杆菌、结核分枝杆菌等其它12种分枝杆菌标准菌株以及大肠杆菌、肺炎链球菌等多种常见微生物均呈阴性反应。试剂盒检测灵敏度可达单个菌细胞、15个基因拷贝,比常规PCR检测灵敏度提高100倍。对每份添加50～100个菌细胞的20份阴性牛奶样品进行检测,均呈阳性反应。重复性试验结果显示,试剂盒组内变异系数为1.41%,组间变异系数为2.42%。采用所研制的副结核分枝杆菌荧光PCR试剂盒对来自广东地区7个奶牛场的250份牛奶样品和粪便样品、来自10个养猪场的143份猪血清样品,以及3批次进口食蟹猴共100份血清样品进行检测,检出牛奶样品中副结核分枝杆菌阳性率为7.7%,牛粪样品中阳性率为3.7%,猪血清样品中阳性率为8.2%,进口猴血清样品中阳性率为3.0%。