【摘 要】
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目 的:初步探究长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MIR4697宿主基因(MIR4697 host gene,MIR4697HG)对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)的成脂向分化调控作用.方法:将BMSCs进行成脂诱导,在不同的时间点(0、1、2、3、5、7、10 d)收集RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)
【机 构】
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北京大学口腔医学院·口腔医院第二门诊部,国家口腔医学中心,国家口腔疾病临床医学研究中心,口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心,口腔数字医学北京市重点实验室,国家卫生健康委员会口腔医学计算机应用工
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目 的:初步探究长链非编码 RNA(long non-coding RNA,lncRNA)MIR4697宿主基因(MIR4697 host gene,MIR4697HG)对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)的成脂向分化调控作用.方法:将BMSCs进行成脂诱导,在不同的时间点(0、1、2、3、5、7、10 d)收集RNA,通过实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)技术检测成脂分化调控相关的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma,PPARy)、CCAAT 增强子结合蛋白 α(CCAAT/enhanced binding protein α,CEBP/α)、脂联素(adiponectin,ADIPQ)编码基因的mRNA以及lncRNA MIR4697HG的表达水平.为了防止脱靶效应,本研究构建了两条不同序列的MIR4697HG shRNA(shMIR4697HG-1,shMIR4697HG-1)并通过慢病毒感染BMSCs,建立MIR4697HG稳定敲减的BMSCs细胞系.采用油红0染色、蛋白质印迹实验和qRT-PCR等方法检测敲减MIR4697HG对BMSCs成脂分化能力的影响.结果:体外诱导BMSCs成脂向分化时,成脂标志基因PPARy、CEBP/α和ADIPQ表达量均显著升高,在此过程中lncRNA MIR4697HG表达也明显增加(P＜0.01).慢病毒感染BMSCs 72 h后,荧光显微镜下可以观察到90％以上细胞成功表达绿色荧光蛋白,qRT-PCR结果显示MIR4697HG敲减效率高于60％;BMSCs敲减MIR4697HG后,在BMSCs成脂诱导7 d时,成脂基因PPARγ、CEBP/α和ADIPQ的转录物(mRNA)水平显著下降(P＜0.01),同时PPARγ和CEBP/α的蛋白质水平也显著降低(P＜0.01).敲减MIR4697HG的BMSCs成脂向分化能力减弱.结论:lncRNA MIR4697HG对 BMSCs成脂向分化有调控作用,敲减MIR4697HG可抑制BMSCs的成脂向分化,提示lncRNA MIR4697HG可能成为治疗骨质疏松症等成脂肪异常疾病的潜在靶点.
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