研究二十二碳六烯酸(DHA)联合选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胆管癌细胞QBC939凋亡的影响及其作用机制。
方法体外培养人胆管癌QBC939细胞株，分别设立DHA组、NS-398组、二者联合组和空白对照组。将0、15、30、45、60、75 μg/ml的DHA和0、25、50、100、150、200 μmol/L的NS-398分别联合作用于胆管癌QBC939细胞；应用CCK8法检测其对QBC939细胞生长的相对抑制率；采用流式细胞术检测QBC939细胞的凋亡情况；应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测QBC939细胞中β-连环蛋白(catenin)和COX-2两种因子的基因表达情况；应用SP免疫细胞化学法测定作用前后QBC939细胞浆中β-catenin和COX-2两种蛋白的表达情况；应用ELISA法测定QBC939细胞上清中两种蛋白分泌情况。
结果DHA和NS-398在体外均能单独抑制QBC939细胞生长。DHA浓度为45 μg/ml，联合NS-398浓度为100 μmol/L时，作用24小时后，细胞生长抑制率达到90.0%，实验组与DHA组、NS-398组和空白组差异均有统计学意义(P<0.05)。继续增加两种药物浓度，细胞生长抑制率变化不明显。流式细胞术显示，DHA联合NS-398能明显促进QBC939细胞早期凋亡；实时PCR显示二者联合能明显抑制QBC939细胞中β-catenin和COX-2基因表达；SP免疫细胞化学实验显示，二者联合能抑制QBC939细胞浆中β-catenin和COX-2两种蛋白表达；ELISA实验显示，二者联合能抑制QBC939细胞中两种蛋白的细胞外分泌。
结论DHA联合NS-398能明显抑制胆管癌QBC939细胞生长，促进胆管癌细胞早期凋亡。二者联合对胆管癌QBC939细胞生长的抑制作用可能是通过抑制β-catenin和COX-2两种因子基因及蛋白水平的表达，进而促进胆管癌QBC939细胞的早期凋亡实现的。