【摘 要】
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【目的】构建琼胶酶Aga D的高效表达体系,优化发酵条件提高重组酶的表达量。【方法】首先根据大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性,优化并合成Aga D的基因,使其适合E.coli表达系统;
【机 构】
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中国海洋大学医药学院海洋药物教育部重点实验室山东省糖科学与糖工程重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(41376144);国家科技支撑计划(N2013BAB01B02);海洋公益性行业科研专项(201105027,201005024)~~
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【目的】构建琼胶酶Aga D的高效表达体系,优化发酵条件提高重组酶的表达量。【方法】首先根据大肠杆菌(E.coli)密码子偏好性,优化并合成Aga D的基因,使其适合E.coli表达系统;考察了不同的E.coli表达宿主;根据N端法则构建了突变体;评价了培养基中添加Ca Cl2和甘氨酸(Gly)对重组酶表达的影响。【结果】成功构建了琼胶酶Aga D的高效表达体系,确定了E.coli AD494(DE3)为最适表达宿主;利用N端法则提高了重组酶的稳定性,缩短了发酵时间;通过在培养基中添加Ca Cl2和甘氨酸(Gly)进一步提高了胞外酶产量。最终,发酵上清中重组酶的活力由20 U/L提高至11300 U/L,比优化前提高了500余倍。【结论】构建了琼胶酶Aga D的高效表达体系,为GH96家族琼胶酶的深入研究奠定了基础。
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