人白细胞介素7在CHO细胞中的表达及活性鉴定

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目的:用CHO细胞表达人白细胞介素7(IL-7),并验证其促细胞增殖功能。方法:构建表达质粒pc DNA5/FRT-IL-7,用Lipo2000将辅助质粒p OG44和表达质粒共转染Flp-In-CHO细胞,潮霉素B筛选并单克隆化稳定表达目的蛋白的细胞;通过Western印迹、ELISA方法验证上清中的目的蛋白,并对其定量;用流式细胞仪检测该蛋白促外周血单核细胞增殖的能力。结果:获得了2株稳定表达IL-7的细胞,IL-7的表达量均为3 mg/(L·d);流式细胞术检测表明,所表达的IL-7的促外周血单核细胞增殖能力强于R&D原核系统表达的IL-7。结论:获得了稳定表达人IL-7的CHO细胞系,且表达的蛋白具有促外周血单核细胞增殖的功能。
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