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妥布拉霉素（Tobramycin,TOB)是S.tenebrarius发酵的次级代谢物，属于的忱基糖苷类抗生素。本文建立了用反相HPLC法分析测定TOB的含量，考察了发酵液预处理条件和试剂及pH对于中间体提取效果的影响，及时反馈发酵液、吸附废液、解吸液、固体粗品中妥布拉霉素效价情况，为中间体各环节的质量控制提供了简便快速、重现性好的方法。色谱柱为C18，150×4.6mm，流动相为乙腈-甲醇-水-醋酸，检测波长365nm。