【摘 要】
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目的:分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对人肝癌细胞HepG2增殖及侵袭能力的影响.方法:通过小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调GRP78表达,筛选最佳siRNA.将人肝癌细胞HepG2分为空白对
【机 构】
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首都医科大学附属北京佑安医院肝病内分泌科,北京,100069
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目的:分析葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对人肝癌细胞HepG2增殖及侵袭能力的影响.方法:通过小干扰RNA(siRNA)技术特异性下调GRP78表达,筛选最佳siRNA.将人肝癌细胞HepG2分为空白对照、阴性对照组及siGRP78三组,分别通过MTT法、Western blot法测定GRP78对HepG2肝癌细胞株生长的影响及GRP78对肝癌细胞蛋白表达的影响;Transwell行侵袭实验,计算各组光密度(OD)值及生长抑制率;另外分别经由GST-pull down法、荧光素标记法检测RhoA活性及FAK磷酸化水平.结果:HepG2细胞转染GRP78 siRNA各片段后,GRP78蛋白均不同程度下调,siGRP78-1为最佳干扰片段;SiGRP78组OD值、视野细胞数平均数均显著低于空白对照组、阴性对照组,生长抑制率显著高于阴性对照组;SiGRP78组RhoA-GTP水平显著高于、FAK磷酸化水平显著低于空白对照组、阴性对照组.结论:对GRP78特异性下调能明显抑制HepG2细胞增殖及侵袭,其可能机制为增强RhoA活性,抑制FAK磷酸化水平.
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