烟草ISSR-PCR反应体系优化的初实验

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为了探索建立烟草的ISSR-PCR最适反应体系,用单因素设计方法对影响ISSR-PCR反应体系的主要影响因素进行优化筛选。结果表明,烟草的最适反应体系为:反应总体积为20μL:2.00μL10×buffer,50ng(1μL)模板DNA,Taq聚合酶的用量为4U(0.8μL),0.6μmol/L(1.2μL)引物,0.75 mmol/L(0.6μL)Mg2+,0.3 mmol/L(2.4μL)d NTP,dd H2O12μL,退火温度为52℃。用筛选的引物对36份烟草种质分别进行PCR扩增,扩增条带清晰,清晰度和多态性都较好,可以认为该反应体系对烟草种质具有较好的可靠性和稳定性。
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