探讨丹参酮ⅡA体外对黑素瘤细胞A375细胞自噬的影响及其信号通路研究。
方法0.5、1、2、4 mg/L丹参酮ⅡA作用黑素瘤A375细胞24、48、72 h后，噻唑蓝（MTT）比色法检测A375细胞的增殖活性。1、2、4 mg/L丹参酮ⅡA作用黑素瘤A375细胞48 h，采用流式细胞仪检测细胞自噬小体的数量，Western印迹检测自噬相关蛋白Beclin-1和微管相关蛋白1轻链3 (LC3）-Ⅱ蛋白及磷酸肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B (Akt）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p70S6激酶1 (p70S6K1）蛋白的表达水平。
结果MTT分析显示，0.5、1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA分别作用黑素瘤A375细胞24、48、72 h，均能抑制A375细胞的增殖能力，且抑制作用呈剂量和时间依赖性（F= 2 564.12、1 235.25，均P < 0.05）。流式细胞仪显示，1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA作用A375细胞48 h后，细胞内自噬小体比例分别为6.91% ± 0.35%、13.11% ± 0.73%、25.51% ± 0.83%，均明显高于对照组（0.41% ± 0.02%），各组间差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示，1、2和4 mg/L丹参酮ⅡA作用A375细胞48 h后，细胞自噬相关蛋白Beclin-1和LC3-Ⅱ表达水平随丹参酮ⅡA浓度增加而升高，各丹参酮ⅡA组间差异有统计学意义，且高于对照组（均P < 0.05）。而PI3K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路中PI3K、p-Akt、p-mTOR和p-p70S6K1蛋白表达随丹参酮ⅡA浓度增加而下降，各丹参酮ⅡA组间差异有统计学意义，且低于对照组（均P < 0.05）。
结论丹参酮ⅡA可通过抑制P13K-Akt-mTOR-p70S6K1信号通路，促进黑素瘤细胞发生自噬。