论文部分内容阅读
摘 要：目的：通过对高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊进行深入的研究讨论，建立其一种全新的氨基水杨酸等有挂物质。方法：利用高效液相色谱法，选择合适的色谱柱，并将磷酸二氢钾、辛烷磺酸钠加入溶解以后，用磷酸对其PH值进行调节，最终形成了流动相位磷酸盐缓冲液。结论：笔者通过结合多年的工作经验，对高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊的有关物质分析试验以后发现，该方法具有快捷、准确的特点，能够对美沙拉嗪控释胶囊的有关物质进行有效的质量控制。
关键词：高效液；相色谱法；美沙拉嗪控释胶囊；有关物质
1 概述
在现代医学疾病史发展过程中，溃疡性结肠炎是一种常见的炎症性疾病，由于其UC病变具备多样性的特点，病情常常是处于不稳定的状态，很有可能引发癌变，造成病人的死亡。现如今，这一疾病已经成为了医学界公认的杂症疾病之一。而美沙拉嗪作为当前最常用的高效临床药物，在美沙拉嗪缓释胶囊的使用过程中，并没有一个相对明确的质量标准体系，并未对该药物的有关物质进行了严格的检测控制，这就导致药品在临床应用中，出现了用药不良的现象，极大的危害了病人的身心健康。因此，就对高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊的有关物质进行了初探分析，并得出以下相关结论，以供参考。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液、对照溶液、对照品溶液等供试液的制备。取本品细粉，加流动相制成每1ml中约含美沙拉嗪0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相准确稀释500倍，作为对照溶液；精密称取3-氨基水杨酸适量，加入流动相溶解并制成每1ml含3-氨基水杨酸1μg的溶液，作为对照品溶液。取按处方比例精密称取空白辅料适量，加流动相制成空白辅料溶液。
2.2 精密称取3-氨基水杨酸约10mg，置100mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。精密量取2mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法，在200～400nm波长范围内扫描。
结果表明3-氨基水杨酸在297nm波长处存在最大吸收，吸光度为0.219，而在220nm波长处，吸光度为0.310，且美沙拉嗪在220nm处有较大吸收。
2.3 精密称取本品适量于100ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。精密量取1ml置100ml的量瓶中，加入3-氨基水杨酸适量，用流动相稀释并制成每1ml分别含美沙拉嗪1μg及3-氨基水杨酸1μg的溶液，作为系统适用性溶液。美沙拉嗪峰和3-氨基水杨酸之间的分离度不小于2。
3 破坏实验
3.1 对上述中的破坏样品，需要采用正确的配制方法来对其进行流动相稀释，直到达到规定的刻度标准要求，才能作为供试溶液。那么，在这种情况下，实验人员必须严格按照色谱条件来对样品进行分别的测定，并根据美沙拉嗪的保留，绘制出完整的色谱图，从而得出详细的氧化破坏结果数据。
通过一系列的研究分析以后发现，本样品在高温、潮湿等光照条件下，通常是处于一个稳定的状态，而对氧化剂则是十分不稳定，特别是对碱的破坏程度，最为突出。这样一来，我们就可以判断出在色谱条件中，能够检测出一些降解产物，并且，其主峰与杂质峰之间有着较好的分离度，存在一定的专属性质。
3.2 对美沙拉嗪进行精密的称取，并将照品溶液进行反复的稀释，最终得出准确的测定结果。与此同时，还需要对信燥的配比进行严格的控制，选取相应的浓度进行分析，使其成为最低检测限的标准。
3.3 实验人员经过对氨基水杨酸的对照品溶液进行多次的稀释以后，最后将信燥的配比定义为十比一，这也是其浓度最低的定量限。其次，还对其他六份定量限浓度的溶液样品进行检定得出，每一份色谱峰的保留时间都有着十分明显的差异，峰面积大小也各不相同。
4 准确度试验
称取适量的氨基水杨酸以及十毫克的对照品，将其放置到一百毫升的计量瓶中，利用流动相溶解的办法，使其完全稀释，直到刻度，并将溶液均匀摇晃，以此来作为储备液1号。而准确度试验的具体流程为：
第一，将五毫升的1号储备液放置到一百毫升的计量瓶中，摇匀以后，记作为储备液2号。第二，称取出氨基水杨酸十五毫克的对照品，放置到一百毫升的计量瓶中，对其进行流动相溶解并稀释，记为3号储备液。第三，实验人员要精密的取出适量的样品，并不能少于3份，这样才能充分保障最终试验结果的精确性。第四，将这些样品分别加入到相应的1号、2号、3号储备液中进样测定，并对其回收率进行外标法的计算。
5 样品溶液放置稳定性试验
取出本品以后，实验人员可以通过利用上述中的检测方法来进行对照溶液、供试品溶液等样品的制备。并按照规定的色谱条件要求，将对照品溶液放入到相应的色谱仪器中，从而记录出准确的色谱图，尤其是要对氨基水杨酸的美沙拉嗪的保留时间进行严格的控制，尽可能将这两者的分离度保持在大于等于2的范围之间。与此同时，当将适量的对照溶液注入到液相色谱仪器后，还需要对其灵敏程度进行认真全面的调节，使其对照品溶液与氨基水杨酸的保留时间的色谱峰相同，最后再利用外标法来对峰面积进行详细的计算。但是，在这一过程中，实验人员必须特别注意的一点问题是，单独的杂质峰面积是不可以大于对照溶液主峰的面积，这样有利于供试品有关物质测定结果的规范统一性。
6 讨论
6.1 检测波长的选择
根据文献，美沙拉嗪及其相关杂质大都在220nm处有最大吸收，并参照《美国药典》、《英国药典》有关物质项下的色谱条件，将检测波长确定为220nm。
6.2 色谱柱的选择
从现行的各国药典中看，美国药典及英国药典原料药均采用C8柱，美国药典采用C8短柱，英国药典采用C8长柱，但实验中发现用C8短柱主峰峰形不甚理想，影响杂质的检测，经试验比较，最终将色谱柱确定为C8长柱。
6.3 色谱条件的选择
《美国药典》34版采用磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈（890：80：30）作为流动相，主峰与相邻杂质峰及定量杂质峰均得到很好的分离，《英国药典》采用高氯酸、磷酸水溶液和高氯酸、磷酸乙腈溶液进行梯度洗脱，主峰出峰时间短，与相邻破坏杂质峰未完全分离，达不到理想的分离效果，故采用《美国药典》有关物质色谱条件。
6.4 对色谱条件进行耐用性试验，其变动因素：柱温（25℃、30℃、35℃）、流速相对值变化±17%、流动相值变化±0.2pH单位、流动相比例变化±10%及不同厂家的色谱柱。耐用性试验结果表明：所有参数变化结果对测定几乎无影响，所有条件变化均不影响测定结果，方法学验证结果也表明本法专属性强，准确度高，重现性好，是较理想的方法。
参考文献
[1]郑小丹，高丽，王锦刚.高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊的有关物质[J].黑龙江医药，2012（03）.
[2]范柏，鲁瑞娟，沙立斌.高效液相色谱法测定注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的有关物质[J].天津药学，2004（03）.
[3]沈学明.美沙拉嗪及SASP治疗溃疡性结肠炎的临床疗效比较[J].中国现代药物应用，2012（12）.
关键词：高效液；相色谱法；美沙拉嗪控释胶囊；有关物质
1 概述
在现代医学疾病史发展过程中，溃疡性结肠炎是一种常见的炎症性疾病，由于其UC病变具备多样性的特点，病情常常是处于不稳定的状态，很有可能引发癌变，造成病人的死亡。现如今，这一疾病已经成为了医学界公认的杂症疾病之一。而美沙拉嗪作为当前最常用的高效临床药物，在美沙拉嗪缓释胶囊的使用过程中，并没有一个相对明确的质量标准体系，并未对该药物的有关物质进行了严格的检测控制，这就导致药品在临床应用中，出现了用药不良的现象，极大的危害了病人的身心健康。因此，就对高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊的有关物质进行了初探分析，并得出以下相关结论，以供参考。
2 方法与结果
2.1 供试品溶液、对照溶液、对照品溶液等供试液的制备。取本品细粉，加流动相制成每1ml中约含美沙拉嗪0.5mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，加流动相准确稀释500倍，作为对照溶液；精密称取3-氨基水杨酸适量，加入流动相溶解并制成每1ml含3-氨基水杨酸1μg的溶液，作为对照品溶液。取按处方比例精密称取空白辅料适量，加流动相制成空白辅料溶液。
2.2 精密称取3-氨基水杨酸约10mg，置100mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。精密量取2mL，置25mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。照紫外-可见分光光度法，在200～400nm波长范围内扫描。
结果表明3-氨基水杨酸在297nm波长处存在最大吸收，吸光度为0.219，而在220nm波长处，吸光度为0.310，且美沙拉嗪在220nm处有较大吸收。
2.3 精密称取本品适量于100ml的量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度。精密量取1ml置100ml的量瓶中，加入3-氨基水杨酸适量，用流动相稀释并制成每1ml分别含美沙拉嗪1μg及3-氨基水杨酸1μg的溶液，作为系统适用性溶液。美沙拉嗪峰和3-氨基水杨酸之间的分离度不小于2。
3 破坏实验
3.1 对上述中的破坏样品，需要采用正确的配制方法来对其进行流动相稀释，直到达到规定的刻度标准要求，才能作为供试溶液。那么，在这种情况下，实验人员必须严格按照色谱条件来对样品进行分别的测定，并根据美沙拉嗪的保留，绘制出完整的色谱图，从而得出详细的氧化破坏结果数据。
通过一系列的研究分析以后发现，本样品在高温、潮湿等光照条件下，通常是处于一个稳定的状态，而对氧化剂则是十分不稳定，特别是对碱的破坏程度，最为突出。这样一来，我们就可以判断出在色谱条件中，能够检测出一些降解产物，并且，其主峰与杂质峰之间有着较好的分离度，存在一定的专属性质。
3.2 对美沙拉嗪进行精密的称取，并将照品溶液进行反复的稀释，最终得出准确的测定结果。与此同时，还需要对信燥的配比进行严格的控制，选取相应的浓度进行分析，使其成为最低检测限的标准。
3.3 实验人员经过对氨基水杨酸的对照品溶液进行多次的稀释以后，最后将信燥的配比定义为十比一，这也是其浓度最低的定量限。其次，还对其他六份定量限浓度的溶液样品进行检定得出，每一份色谱峰的保留时间都有着十分明显的差异，峰面积大小也各不相同。
4 准确度试验
称取适量的氨基水杨酸以及十毫克的对照品，将其放置到一百毫升的计量瓶中，利用流动相溶解的办法，使其完全稀释，直到刻度，并将溶液均匀摇晃，以此来作为储备液1号。而准确度试验的具体流程为：
第一，将五毫升的1号储备液放置到一百毫升的计量瓶中，摇匀以后，记作为储备液2号。第二，称取出氨基水杨酸十五毫克的对照品，放置到一百毫升的计量瓶中，对其进行流动相溶解并稀释，记为3号储备液。第三，实验人员要精密的取出适量的样品，并不能少于3份，这样才能充分保障最终试验结果的精确性。第四，将这些样品分别加入到相应的1号、2号、3号储备液中进样测定，并对其回收率进行外标法的计算。
5 样品溶液放置稳定性试验
取出本品以后，实验人员可以通过利用上述中的检测方法来进行对照溶液、供试品溶液等样品的制备。并按照规定的色谱条件要求，将对照品溶液放入到相应的色谱仪器中，从而记录出准确的色谱图，尤其是要对氨基水杨酸的美沙拉嗪的保留时间进行严格的控制，尽可能将这两者的分离度保持在大于等于2的范围之间。与此同时，当将适量的对照溶液注入到液相色谱仪器后，还需要对其灵敏程度进行认真全面的调节，使其对照品溶液与氨基水杨酸的保留时间的色谱峰相同，最后再利用外标法来对峰面积进行详细的计算。但是，在这一过程中，实验人员必须特别注意的一点问题是，单独的杂质峰面积是不可以大于对照溶液主峰的面积，这样有利于供试品有关物质测定结果的规范统一性。
6 讨论
6.1 检测波长的选择
根据文献，美沙拉嗪及其相关杂质大都在220nm处有最大吸收，并参照《美国药典》、《英国药典》有关物质项下的色谱条件，将检测波长确定为220nm。
6.2 色谱柱的选择
从现行的各国药典中看，美国药典及英国药典原料药均采用C8柱，美国药典采用C8短柱，英国药典采用C8长柱，但实验中发现用C8短柱主峰峰形不甚理想，影响杂质的检测，经试验比较，最终将色谱柱确定为C8长柱。
6.3 色谱条件的选择
《美国药典》34版采用磷酸盐缓冲液-甲醇-乙腈（890：80：30）作为流动相，主峰与相邻杂质峰及定量杂质峰均得到很好的分离，《英国药典》采用高氯酸、磷酸水溶液和高氯酸、磷酸乙腈溶液进行梯度洗脱，主峰出峰时间短，与相邻破坏杂质峰未完全分离，达不到理想的分离效果，故采用《美国药典》有关物质色谱条件。
6.4 对色谱条件进行耐用性试验，其变动因素：柱温（25℃、30℃、35℃）、流速相对值变化±17%、流动相值变化±0.2pH单位、流动相比例变化±10%及不同厂家的色谱柱。耐用性试验结果表明：所有参数变化结果对测定几乎无影响，所有条件变化均不影响测定结果，方法学验证结果也表明本法专属性强，准确度高，重现性好，是较理想的方法。
参考文献
[1]郑小丹，高丽，王锦刚.高效液相色谱法测定美沙拉嗪控释胶囊的有关物质[J].黑龙江医药，2012（03）.
[2]范柏，鲁瑞娟，沙立斌.高效液相色谱法测定注射用阿莫西林钠克拉维酸钾的有关物质[J].天津药学，2004（03）.
[3]沈学明.美沙拉嗪及SASP治疗溃疡性结肠炎的临床疗效比较[J].中国现代药物应用，2012（12）.