探讨趋化因子受体CXCR4在肾癌索拉非尼治疗耐药中的作用及可能的机制。

2014年1月至2016年6月将肾癌细胞786－O接种于裸鼠前肋侧皮下荷瘤，每点5×10⁶个细胞，在移植瘤体积约100 mm³时，将裸鼠分为对照组和索拉非尼组，每组3只。索拉非尼组予索拉非尼(80 mg/kg，1次/d)灌胃，对照组予等量生理盐水灌胃。对照组第5周肿瘤体积即超过1 500mm³，切取肿瘤作为对照组织；索拉非尼组第8周肿瘤开始加速生长，至第13周肿瘤体积超过1 500mm³，取第13周肿瘤作为耐药组织。采用实时定量PCR、蛋白质印迹和免疫组化法检测对照组织和耐药组织中CXCR4的表达量。构建pcDNA3.1－CXCR4质粒，将其转染至786－O细胞中过表达CXCR4，实时定量PCR和蛋白质印迹法测定过表达效果。使用CCK－8和单克隆形成实验检测细胞的药物反应性变化，比较对照组、过表达组和抑制剂组(CXCR4过表达＋CXCR4抑制剂AMD3100)的耐药性。蛋白质印迹法检测对照组、单用索拉非尼组、过表达CXCR4＋索拉非尼组及过表达CXCR4＋索拉非尼＋AMD3100组786－O细胞存活关键分子PKB、ERK、STAT3的磷酸化情况。

与对照组织相比，耐药组织CXCR4的mRNA水平升高(3.22±0.23)倍，蛋白质迹法检测结果显示蛋白表达量平均升高(2.33±0.47)倍，差异均有统计学意义(均P<0.01)。过表达CXCR4后，CXCR4的mRNA表达量升高了(78.3±5.3)倍，蛋白表达量升高了(2.80±0.95)倍，差异均有统计学意义(均P<0.01)，过表达模型构建成功。用CCK－8法测定对照组、过表达组和抑制剂组对索拉非尼的药物反应性曲线，计算出IC50分别为(7.5±0.8)、(10.3±0.7)、(5.7±0.6)μmol/L，差异有统计学意义(P<0.05)。在索拉非尼7.5 μmol/L作用下，对照组、过表达组和抑制剂组形成的克隆数分别为(26±5)、(56±12)、(42±9)个，差异有统计学意义(P<0.05)。索拉非尼可以降低PKB、ERK、STAT3的磷酸化，而过表达CXCR4可以逆转索拉非尼对PKB、ERK、STAT3磷酸化的抑制，使用AMD3100抑制CXCR4活性后，PKB、ERK、STAT3磷酸化又重新被抑制。

CXCR4可以促进肾癌索拉非尼耐药，并且CXCR4在继发性耐药的肿瘤组织中表达量升高；CXCR4可能通过活化细胞的促存活通路导致耐药；抑制CXCR4信号通路有望提高索拉非尼治疗肾癌的效果。