特异沉默人核糖核苷酸还原酶M2基因对人骨肉瘤细胞生物学特性的影响

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目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默核糖核苷酸还原酶M2(RRM2)基因表达对入骨肉瘤细胞Saos-2生物学影响及分子机制.方法 利用小干扰RNA技术,观察沉默Saos-2细胞中RRM2基因的表达,用实时荧光定量PCR(Real time-PCR)及Western blot技术检测人骨肉瘤细胞Saos-2和人正常成骨细胞hFOB1.19的mRNA及蛋白的表达;用CCK-8方法检测si-RRM2对Saos-2细胞增殖的影响;用Transwell细胞迁移系统检测si-RRM2对Saos-2细胞迁移能力的影响;用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测Saos-2细胞凋亡;采用Western blot技术检测细胞周期调控因子细胞周期素D1(Cyclin D1)和抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)蛋白水平变化.结果 Saos-2细胞RRM2 mRNA和蛋白比hFOB1.19细胞高表达;用si-RRM2转染Saos-2细胞后,Real time-PCR结果证实能时间及剂量依赖性下调RRM2基因表达;CCK-8方法结果显示下调RRM2基因会时间及剂量依赖性抑制Saos-2增殖,而人正常成骨细胞增殖抑制没有显著变化;Transwell细胞迁移系统检测显示下调RRM2基因后,显著抑制了Saos-2的迁移能力;si-RRM2联合化疗药物阿霉素促进Saos-2细胞凋亡;Western blot结果显示沉默RRM2后细胞周期调控因子Cyclin D1和抗凋亡蛋白Bcl-2均下调.结论 RRM2的过表达与人骨肉瘤细胞Saos-2的高增殖和迁移能力有关,抑制RRM2的功能是治疗人骨肉瘤的一个潜在的治疗策略。

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