【摘 要】
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为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(SjGST)基因工程重组蛋白,以日本血吸虫(中国大陆株)cDNA为模板,设计、合成特定寡核苷酸引物,RT-PCR法扩增GST编码基因序列,将扩增产物
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为表达、获取日本血吸虫谷胱甘肽转移酶(SjGST)基因工程重组蛋白,以日本血吸虫(中国大陆株)cDNA为模板,设计、合成特定寡核苷酸引物,RT-PCR法扩增GST编码基因序列,将扩增产物连接pGEM-T克隆载体,再亚克隆到真、原核表达质粒pBK-CMV中,转染大肠杆菌XL1-blue,经IPTG诱导后用SDS-PAGE分析表达效果.结果RT-PCR法特异性扩增出日本血吸虫GST编码区基因片段,其大小约为670bp.重组pGEM-T克隆载体和重组-GST表达质粒经双酶切及以相应质粒为模板的PCR法均证实其中含有插入的GST目的基因.重组菌经IPTG诱导后以大小约29KD融合蛋白形式表达,诱导后6小时表达产物约占菌体蛋白30%.结论pBK-SjcGST重组质粒的成功构建和高效表达,为进一步纯化提取基因工程重组日本血吸虫GST蛋白,分析其在血吸虫病免疫诊断、免疫预防中的作用提供了必要的条件.
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