【摘 要】
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目的 用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba2)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价.
【机 构】
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南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所,南京,210002
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目的 用念珠菌烯醇化酶(Eno)、果糖二磷酸醛缩酶(Fba2)及烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(TR)3种基因重组蛋白质,建立检测这3种蛋白质特异性抗体的蛋白质芯片法,并进行临床应用评价.方法 用重组Eno、Fba2和TR作为固相抗原构建蛋白质芯片.对芯片制备及血清中相应抗体测定的反应条件进行优化.对方法的重复性、稳定性及特异性进行考察,并测定临床确诊的侵袭性念珠菌病(IC)、侵袭性曲霉病(IA)患者血清中的相应抗体.结果 蛋白质芯片以硝酸纤维素膜为固相载体,以Tris-HCl为载样液,重组Eno、Fba1、TR最适点阵浓度分别为0.5 mg/mL、0.04 mg/mL和1.0 mg/mL,用含50 g/L脱脂奶粉的PBS溶液封闭,待测血清稀释度为1∶10.抗Eno抗体和抗Fba1抗体诊断IC的敏感性和特异性分别为67.6％ (71/105)和96.5％ (299/310),64.8％ (68/105)和90.3％ (280/310);联合检测抗Eno抗体和抗Fba1抗体,可将敏感性提高至81.0％.抗TR抗体诊断IA的敏感性为71.4％ (30/42),特异性为98.1％(366/373).结论 建立了同时检测两种真菌的3种不同抗体的蛋白质芯片方法,敏感性尚可,可用于高危人群的筛查.
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