抗生素作为环境介质中一种典型的新污染物，在各类环境水样中检出频率高且浓度低，为快速、灵敏、准确地分析各类水体中的抗生素，建立了固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法（SPE-HPLC-MS/MS）同时测定环境水样中4种青霉素类、12种喹诺酮类和6种大环内酯类共22种抗生素的分析方法。针对抗生素特性和样品基质特点优化前处理方法，重点优化固相萃取柱、水样pH值、水样中乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）加入量。在200 m L水样中加入0.5 g Na2EDTA，并调节水样的pH值至3，水样经HLB固相萃取柱富集净化，以乙腈-0.15%（v/v）甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱，采用电喷雾电离源，在正离子模式下使用多反应监测模式进行定性定量分析。结果显示，22种抗生素的相关系数（r）≥0.995，呈现良好的线性关系，方法检出限和定量限分别为2.3～10.7 ng/L和9.2～42.8 ng/L，地表水中3个水平下的加标回收率为61.2%～157%，相对标准偏差（RSD）为1.0%～21.9%，废水中3个水平下的加标回收率为50.1%～129%,RSD为1.2%～16.9%。方法成功用于水库、地表水、污水处理厂出口、畜禽养殖场等不同类型水样中抗生素的同时测定，其中地表水和畜禽养殖废水中大部分抗生素有检出，在地表水中林可霉素检出率为90%，在畜禽养殖废水中氧氟沙星的检出含量最高，为127 ng/L。该方法的检出限和回收率满足定量分析要求，具有富集水样体积少、分析时间短、适用范围广等优势，特别适用于突发环境污染应急监测，同时为摸清新污染物环境赋存底数和新污染物治理与管控提供有力支撑。