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【摘要】目的：分析探讨血型鉴定的影响因素。方法：对676例孕妇采用玻片法和试管法进行血型鉴定。结果：玻片法和试管法存在结果不符现象，其准确率低于试管法。结论：血型鉴定存在一定的影响因素，血型鉴定时，需要综合考虑进行结果判断。
【关键词】盐水凝集法；ABO血型鉴定；影响因素
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）12-0301-02
血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。血型鉴定是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。盐水凝集法是临床最常用的血型鉴定方法，方法简单，操作方便，又经济实惠。其分为玻片法和试管法，结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。通过对676名孕妇的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析，探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
1对象、材料和方法
1.1对象 2014年1月 2014年8月间676名来做孕检的孕妇，年龄18～40岁，平均年龄28岁。每人抽取EDTA抗凝血，在30分钟内完成ABO血型鉴定操作。
1.2材料
1.2.1离心机、恒温水浴箱、生理盐水、专用玻璃蜡笔、一次性使用滴管、清洁干燥的玻片和试管。
1.2.2抗A、抗B血型试剂（单克隆抗体）；北京金豪制药股份有限公司提供。
1. 3方法
1.3.1 玻片法：取清洁玻片1张，用蜡笔划成方格并注明抗A、抗B字样。分别用滴管滴加抗A、抗B标准血清各1滴玻片上抗A、抗B处，再各加受检者血样（5%红细胞悬液或全血）1滴，不断轻轻转动，使标准血清与受检者红细胞悬液充分混匀，连续1-5min，肉眼观察有无凝集（或溶血）反应，必要时可用低倍镜观察结果。
1.3.2试管法：取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标明抗A、抗B字样，分别加入抗A、抗B标准血清各1滴，于相应标记的试管；然后分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀；以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
结果判断：凝集判断标准红细胞均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性，红细胞出现凝集为阳性。
2 结果
2.1 玻片法和试管法的血型鉴定结果见下表：
方法 总人数 O型（人） A型（人） B型（人） AB型（人） 备注
玻片法 676 282 159 183 52
试管法 676 280 160 184 52
全部数据采用SPSS1 1.5统计软件包处理， P<9.05有差异，有统计学意义。从表中可以看出不论是玻片法还是试管法，676名孕妇的血型分布是一致的，即O型最多，之后依次为B、A、AB，即O>B>A>AB。
2.2 玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同，而A型、B型和O型人数不完全一致，存在一定的差异，具体数据上表。
3 讨论
血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一， 在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。
3.1 医务人员的问题
3.1.1临床医生在填写输血申请时，没有做血型检测，单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误。
3.1.2临床护士在抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号，仅凭印象，抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合。
3.1.3检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误。
3.2 被检红细胞
3.2.1血型测定的错误：检测时，因患者红细胞悬液浓度过低，又只用肉眼观察结果，使之在血型抗原较弱的情况下，微弱、细小的凝集未看到，而造成定型报告错误。
3.2.2 标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本，红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时，可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。
3.2.3 冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，4℃ 条件下，正常人血清中的冷凝集素效价低于1：16，冷凝集素效价增高是导致献血者血型定型不符的常见因素 。在较低温度条件下，冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象，凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37℃不能凝集标准RBC和自身RBC，因此不会造成血型误判，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集，容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素，在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞，以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。
3.2.4 ABO亚型在血型血清学试验中是导致定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原，是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A，和A ，其他A亚型不多见，而B亚型通常比A亚型更少。
3.2.5 ABO血型抗体减弱：ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成血型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱，可以通过增加血清用量，降低反应温度，延长反应时间，应用低离子强度溶液等方法，检出低效价的抗一A和抗一B。 3.3 实验器材
3.3.1所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。3.3.2红细胞浓度按要求配制，红细胞与相应抗体的比例适当。
3.3.3反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。
3.4 其它因素
3.4.1经输血或妊娠等免疫刺激产生，在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应，导致ABO血型鉴定结果不符。
3.4.2类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，感染体征病人配血不合时，应考虑类B。
3.4.3磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺，3个月后，其血清能凝集A、AB型的红细胞，也能凝集B型的红细胞。另外，注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗体，而青霉素已吸附在红细胞表面，当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
总之，在ABO血型鉴定试验中，影响因素较多，如果出现血型鉴定结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判，引发不良后果。因此，在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，查明原因，以获得ABO血型的准确定型，确保安全输血。
参考文献：
[1]张悦，袁丽杰.构建医学检验专业技能培训体系的规划与设计思路[q].现代生物医学进展，2006，6（9）：127.
[2]王莉，田素莹.在临床实践教学中培养医学生人文执业素质[J].中国医疗前沿，2007，2（13）：41.
[3]尚晓斌，黄昌杰，莫诚航，等.对医学实习生进行内科临床实践能力培养的教学体会[J].广西医科大学学报，2008，25（10）：235236.
[4]《中国药典》三部，2010版
[5]《体外诊断试剂说明书编写指导原则》，国家食品药品监督管理局（2007-04-28）
[6]叶应妩，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程/中中华人民共和国医政司.—3版.—南京：东南大学出版社，2006.10ISBN7—5641—6
【关键词】盐水凝集法；ABO血型鉴定；影响因素
【中图分类号】R-0 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801（2014）12-0301-02
血型是人类血液以血型抗原为表现形式的遗传性状，ABO血型系统和Rh血型系统是红细胞的两大血型抗原抗体系统，在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。ABO血型鉴定，即指ABH血型抗原的检测。红细胞含A抗原的叫A型，含B抗原的叫B型，含A和B抗原的叫AB型；不含A、B抗原，而含H抗原的称O型。血型鉴定是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。盐水凝集法是临床最常用的血型鉴定方法，方法简单，操作方便，又经济实惠。其分为玻片法和试管法，结果在实际操作中会受到诸多因素的影响。通过对676名孕妇的玻片法和试管法的血型鉴定结果进行统计分析，探讨ABO血型鉴定中的影响因素。
1对象、材料和方法
1.1对象 2014年1月 2014年8月间676名来做孕检的孕妇，年龄18～40岁，平均年龄28岁。每人抽取EDTA抗凝血，在30分钟内完成ABO血型鉴定操作。
1.2材料
1.2.1离心机、恒温水浴箱、生理盐水、专用玻璃蜡笔、一次性使用滴管、清洁干燥的玻片和试管。
1.2.2抗A、抗B血型试剂（单克隆抗体）；北京金豪制药股份有限公司提供。
1. 3方法
1.3.1 玻片法：取清洁玻片1张，用蜡笔划成方格并注明抗A、抗B字样。分别用滴管滴加抗A、抗B标准血清各1滴玻片上抗A、抗B处，再各加受检者血样（5%红细胞悬液或全血）1滴，不断轻轻转动，使标准血清与受检者红细胞悬液充分混匀，连续1-5min，肉眼观察有无凝集（或溶血）反应，必要时可用低倍镜观察结果。
1.3.2试管法：取洁净小试管（内径10mm×60mm）2支，分别标明抗A、抗B字样，分别加入抗A、抗B标准血清各1滴，于相应标记的试管；然后分别加入被检者5%红细胞生理盐水悬液l滴于各试管充分混匀；以1000转/分的速度离心1分钟判定结果。将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（或溶血）现象。如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
结果判断：凝集判断标准红细胞均匀分布，无凝集颗粒，显微镜下红细胞分散存在，无凝集靠拢现象为阴性，红细胞出现凝集为阳性。
2 结果
2.1 玻片法和试管法的血型鉴定结果见下表：
方法 总人数 O型（人） A型（人） B型（人） AB型（人） 备注
玻片法 676 282 159 183 52
试管法 676 280 160 184 52
全部数据采用SPSS1 1.5统计软件包处理， P<9.05有差异，有统计学意义。从表中可以看出不论是玻片法还是试管法，676名孕妇的血型分布是一致的，即O型最多，之后依次为B、A、AB，即O>B>A>AB。
2.2 玻片法和试管法的鉴定结果显示AB型人数相同，而A型、B型和O型人数不完全一致，存在一定的差异，具体数据上表。
3 讨论
血型由血型基因决定，是血细胞的主要特征之一， 在临床输血和血液遗传学研究上有重要意义。输血安全是临床输血的首要问题，正确的血型鉴定是保证输血安全的前提条件。
3.1 医务人员的问题
3.1.1临床医生在填写输血申请时，没有做血型检测，单凭印象或听信患者的自诉血型而造成血型错误。
3.1.2临床护士在抽取血标本时，未校对患者的姓名、床号，仅凭印象，抽了其他人的血液而造成血型报告错误或交叉配血不合。
3.1.3检验科人员没有对报告核对正确，造成血型鉴定错误。
3.2 被检红细胞
3.2.1血型测定的错误：检测时，因患者红细胞悬液浓度过低，又只用肉眼观察结果，使之在血型抗原较弱的情况下，微弱、细小的凝集未看到，而造成定型报告错误。
3.2.2 标本新鲜，严防污染。细菌污染的标本，红细胞上T抗原被激活，与标准血清中的抗T抗体结合，出现全凝集现象，干扰血型鉴定。某些疾病如多发性骨髓瘤所致的高球蛋白血症在做ABO血型鉴定时出现假凝集，可加做自身血清和红细胞，自身红细胞和生理盐水对照试验及结合反定型结果进行鉴定。当疑有血浆成分干扰血型鉴定时，可用生理盐水反复洗涤红细胞以除去干扰。
3.2.3 冷凝集素属于冷反应性的自身抗体，4℃ 条件下，正常人血清中的冷凝集素效价低于1：16，冷凝集素效价增高是导致献血者血型定型不符的常见因素 。在较低温度条件下，冷凝集素能够与标准红细胞和自身红细胞产生凝集现象，凝集强度随着温度的升高而减弱。低效价的冷凝集素在37℃不能凝集标准RBC和自身RBC，因此不会造成血型误判，但高效价的冷凝集素在37℃仍可产生较强凝集，容易造成血型误判。如果献血者血清中含有高效价的冷凝集素，在血型鉴定试验中应使用37℃生理盐水洗涤红细胞，以排除冷凝集素的干扰。在肺炎、支原体肺炎、肝硬化等疾病患者血清中，冷凝集素很高，严重干扰血型鉴定。
3.2.4 ABO亚型在血型血清学试验中是导致定型不符的主要原因之一。亚型属于同一血型抗原，是由基因所决定的抗原结构和位点数改变导致的弱表现型。在A抗原中主要为A，和A ，其他A亚型不多见，而B亚型通常比A亚型更少。
3.2.5 ABO血型抗体减弱：ABO血型规则抗体合成量的不足也是造成血型不符的重要因素。当献血者血清中抗一A和抗一B效价减弱，可以通过增加血清用量，降低反应温度，延长反应时间，应用低离子强度溶液等方法，检出低效价的抗一A和抗一B。 3.3 实验器材
3.3.1所用器材必须清洁、干燥，试管、滴管要专用，标记清楚。3.3.2红细胞浓度按要求配制，红细胞与相应抗体的比例适当。
3.3.3反应温度、反应时间、离心时间是血型鉴定的重要影响因素，要按操作规程严格控制。
3.4 其它因素
3.4.1经输血或妊娠等免疫刺激产生，在献血者中常见的不规则抗体是抗一M、抗一N和抗一A等。在反定型试验中，不规则抗体可以和标准红细胞上相应的抗原发生凝集反应，导致ABO血型鉴定结果不符。
3.4.2类B抗原某些受肠道革兰氏阴性杆菌感染的病人，红细胞获得了类B抗原，A型病人可误定为AB型，O型误定为B型。因此，感染体征病人配血不合时，应考虑类B。
3.4.3磺胺类药物引起的凝集有人报道一个B型的献血员阑尾术后用氨苯磺胺，3个月后，其血清能凝集A、AB型的红细胞，也能凝集B型的红细胞。另外，注射青霉素后，有些人的血清中含有青霉素抗体，而青霉素已吸附在红细胞表面，当此红细胞与含有青霉素抗体的血清相遇时便发生凝集。
总之，在ABO血型鉴定试验中，影响因素较多，如果出现血型鉴定结果不符，不能轻易发报告，否则，可致ABO血型的误判，引发不良后果。因此，在具备认真的工作态度的基础上，还需要不断积累丰富的血型鉴定经验，对异常结果进行系统全面地分析，查明原因，以获得ABO血型的准确定型，确保安全输血。
参考文献：
[1]张悦，袁丽杰.构建医学检验专业技能培训体系的规划与设计思路[q].现代生物医学进展，2006，6（9）：127.
[2]王莉，田素莹.在临床实践教学中培养医学生人文执业素质[J].中国医疗前沿，2007，2（13）：41.
[3]尚晓斌，黄昌杰，莫诚航，等.对医学实习生进行内科临床实践能力培养的教学体会[J].广西医科大学学报，2008，25（10）：235236.
[4]《中国药典》三部，2010版
[5]《体外诊断试剂说明书编写指导原则》，国家食品药品监督管理局（2007-04-28）
[6]叶应妩，王毓三，申子瑜，等.全国临床检验操作规程/中中华人民共和国医政司.—3版.—南京：东南大学出版社，2006.10ISBN7—5641—6