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目的：建立以高效毛细管电泳法测定甲氨蝶呤血药浓度的方法。方法：利用正交试验设计，优化电泳条件。最终选择以茶碱为内标。生物样本经前处理后，电泳缓冲溶液pH值为10．0，硼酸盐缓冲溶液浓度为40mmol·L^-1，分离电压为20kV，分离温度为18℃，紫外检测波长为214nm，压力进样10s。结果：甲氨蝶呤与内标在10min内达到分离，甲氨蝶呤血浆浓度在0．317～63．40mg·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9998）；相对回收率为84．05％～94．73％，绝对回收率为69．70