论文部分内容阅读
【摘要】 目的：评价ELISA定量检测甲胎蛋白（AFP）在普查早期肝癌中的临床应用。方法：用ELISA（双抗体夹心酶联免疫吸附法）对9580例体检者进行AFP浓度检测，对ELISA检测阳性的样本用化学发光微粒子免疫分析法（CLEIA）重新检测AFP水平，并对结果进行统计对比分析。结果：ELISA法定量检测AFP在体检人群中有2.23%的阳性率，ELISA与CLEIA检测AFP阳性例数差异无统计学意义，AFP>300 μg/L确诊肝癌发生率达100%。结论：ELISA定量检测AFP对早期肝癌诊断率高，分AFP浓度段诊断肝癌准确性高，AFP>300 μg/L肝癌发生可能性达100%，试剂成本低，操作简便快速，适合大批量体检普查应用。
【关键词】 ELISA； 甲胎蛋白； 化学发光法； 体检普查； 应用价值
甲胎蛋白（AFP）是1956年Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种专一性的甲种球蛋白，它是一种糖蛋白，每分子含两条复合糖链，不同组织合成AFP糖链的组成不同[1]。AFP是个体发育和进行性肿瘤的生长调节因子，参与细胞分化、生长调节及肿瘤的发生，70%以上的肝细胞癌患者血AFP升高，检测AFP浓度对原发性肝癌具有重要的诊断意义，是发现早期肝癌的主要指标之一。而AFP检测结果为实验室互认项目，现在实验室常用的AFP定量检测方法学有ELISA、放射免疫法和化学发光法等几种，其中ELISA法以快速、简便实效而被广泛应用[2-4]。本研究对ELISA法定量检测AFP做回顾性评价对比分析，为早期肝癌的诊断和大批量的健康体检普查肝癌提供依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 9580例体检者均为本院2010年1月-2012年1月体检普查者，男6227例，女3353例，年龄22～75岁，平均46岁；其中肝癌患者根据中华人民共和国卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的“新编常见恶性肿瘤治规范”制定的肝癌临床诊断标准和分期标准[5]，均经影像学检查、组织病理学及临床确诊。所有患者均于早晨空腹采取外周静脉血，两小时内3000 r/min离心15 min 分离血清检测。
1.2 方法 用ELISA（双抗体夹心酶联免疫吸附法）对9580例体检者进行AFP浓度检测，ELISA法AFP试剂和标准血清均购自河南郑州安图生物工程股份有限公司，洗板机购自美国Bio-Rad公司，酶标仪为奥地利Anthos 2010/HT酶标仪，均严格按说明书操作。
1.3 对ELISA检测阳性的样本用化学发光微粒子免疫分析法（CLEIA）重新检测AFP水平，试剂盒购自美国BECKMAN公司，仪器为BECKMAN公司的ACCESS全自动化学发光免疫分析仪，室内质控通过后进行常规测定，对AFP结果进行四个浓度段统计对比分析。
1.4 统计学处理 采用PEMS 3.1软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
用ELISA法检测9580例体检者AFP阳性例数为214例，阳性率为2.23%（214/9580）；对ELISA检测阳性的样本用化学发光微粒子免疫分析法（CLEIA）重新检测AFP水平， ELISA和CLEIA检测结果及阳性例数差异均无统计学意义（P>0.01），在AFP各检测浓度段确诊肝癌例数分别为：10.0～20.0 μg/L浓度段1例，确诊阳性率为0.8%；20～100 μg/L
浓度段3例，确诊阳性率为5.9%；100～300 μg/L浓度段14例，确诊阳性率为51.8%；>300 μg/L浓度段11例，确诊阳性率为100%。结果见表1。
3 讨论
近年来，随着检验医学的发展和对实验室质量要求的提高，人们越来越关注各检测系统间检测结果的相关性，如何实现不同实验室、不同检测系统对相同检验项目结果有较好的可比性，这对不同仪器互认和实验室认可非常重要 [6]。AFP是由胎肝细胞和卵黄囊合成的糖蛋白，是诊断原发性肝癌最灵敏的指标；AFP目前仍然是公认的早期诊断和筛查原发性肝癌的指标[7]，已广泛用于肝癌的普查、诊断、判断治疗效果和预测复发。AFP主要应用于发现和监测原发性肝细胞肝癌，其次应用于原发性肝癌的疗效监测[8]。而AFP也是各实验实间结果互认项目之一。化学发光法检测的试剂昂贵形成了成本高而难以在基层医院推广使用，也难以在大批量体检普查中使用。
虽然AFP特异性、敏感性不很理想，但仍是大规模体检、筛查肝癌所最常用的血清标志物[9]。本研究中，用ELISA法检测9580例体检者AFP阳性例数为214例，阳性率为2.23%，而ELISA和CLEIA检测结果及阳性例数差异均无统计学意义，从表1可见，确诊肝癌例数在AFP各浓度段均有阳性率，说明在10.0～20.0 μg/L浓度段肝癌发生可能性为0.8%，20～100 μg/L浓度段肝癌发生可能性为5.9%，100～300μg/L
浓度段肝癌发生可能性为51.8%，>300 μg/L浓度段肝癌发生可能性为100%。化学发光法在线性范围和精密度等方面明显优于ELISA法，但是在大批量的普查样本检测中，ELISA法具有快速、简便、成本低廉的优点，在健康体检、人群普查、良性肝病患者定期检查中起到很好筛查作用[10]。对于大批量的健康体检样本，无论是经济成本还是检测速度，ELISA检测AFP均优于CLEIA，其缺点是检测线性范围较小，但对于高值样本还能检测出阳性，只是对于后期的疗效观测不理想。所以，在大批量的健康体检普查肿瘤标志物，检测AFP使用ELISA法为最佳选择。
综上所述，ELISA定量检测AFP水平敏感性高，分AFP浓度段考虑诊断肝癌准确性高，AFP>300 μg/L肝癌发生可能性达100%，且试剂成本低，操作简便快速，适合大批量体检普查应用，对一时难以购买化学发光仪器的基层医疗机构，ELISA法也是一个很好而实用的诊断早期肝癌的检测方法。
参考文献
[1]沈铮，沈霞.甲胎蛋白及及异质体检测的临床应用价值[J].生海医学检验杂志， 2000，12（6）：361-362.
[2]张强，雷清.乙肝表面抗原大蛋白在基医院的应用[J].中国医药导刊 ，2008，12（8）：1249-1250.
[3]郑定喜，刘仿.Elisa与ICA法对甲胎蛋白检测的比较[J].中国医药科学，2011，5（9）：153.
[4]李金明. 临床酶免疫测定术[M].北京：人民军医出版社，2005：217.
[5]中国抗癌协会.新编常见恶性肿瘤诊治规范原发性肝癌[M]. 北京：北京医科大学与协和医科大学联合出版社，1999：22-23.
[6]李泰阶，李山，秦雪，等. 三台雅培全自动免疫分析仪测定AFP、CEA水平的可比性研究[J].标记免疫分析与临床，2009，16（4）：111-113.
[7]靳晓亮，杨波，关方霞，等.肿瘤与肿瘤标志物研究中证据的思考[J].新思维与新探索，2009，30（2）：48-50.
[8]董菊子，邓芝云，张峰，等.AFP CEA和CA199联合检测在原发性肝癌诊断中的应用[J].西北国防医学杂志， 2011，32（4）：123.
[9]王桂荣. 实验室诊断原发性肝癌几种方法的比较与评价[J].中国民康医学，2008，20（8）：724.
[10]洪霞，吴红波. 酶联免疫法和化学发光免疫法检测血清的比较[J].九江医学，2008，23（3）：54.
（收稿日期：2012-12-26） （本文编辑：陈丹云）
【关键词】 ELISA； 甲胎蛋白； 化学发光法； 体检普查； 应用价值
甲胎蛋白（AFP）是1956年Bergstrandh和Czar在人胎儿血清中发现的一种专一性的甲种球蛋白，它是一种糖蛋白，每分子含两条复合糖链，不同组织合成AFP糖链的组成不同[1]。AFP是个体发育和进行性肿瘤的生长调节因子，参与细胞分化、生长调节及肿瘤的发生，70%以上的肝细胞癌患者血AFP升高，检测AFP浓度对原发性肝癌具有重要的诊断意义，是发现早期肝癌的主要指标之一。而AFP检测结果为实验室互认项目，现在实验室常用的AFP定量检测方法学有ELISA、放射免疫法和化学发光法等几种，其中ELISA法以快速、简便实效而被广泛应用[2-4]。本研究对ELISA法定量检测AFP做回顾性评价对比分析，为早期肝癌的诊断和大批量的健康体检普查肝癌提供依据。
1 材料与方法
1.1 标本来源 9580例体检者均为本院2010年1月-2012年1月体检普查者，男6227例，女3353例，年龄22～75岁，平均46岁；其中肝癌患者根据中华人民共和国卫生部医政司组织并由全国肿瘤防治办公室与中国抗癌协会合编的“新编常见恶性肿瘤治规范”制定的肝癌临床诊断标准和分期标准[5]，均经影像学检查、组织病理学及临床确诊。所有患者均于早晨空腹采取外周静脉血，两小时内3000 r/min离心15 min 分离血清检测。
1.2 方法 用ELISA（双抗体夹心酶联免疫吸附法）对9580例体检者进行AFP浓度检测，ELISA法AFP试剂和标准血清均购自河南郑州安图生物工程股份有限公司，洗板机购自美国Bio-Rad公司，酶标仪为奥地利Anthos 2010/HT酶标仪，均严格按说明书操作。
1.3 对ELISA检测阳性的样本用化学发光微粒子免疫分析法（CLEIA）重新检测AFP水平，试剂盒购自美国BECKMAN公司，仪器为BECKMAN公司的ACCESS全自动化学发光免疫分析仪，室内质控通过后进行常规测定，对AFP结果进行四个浓度段统计对比分析。
1.4 统计学处理 采用PEMS 3.1软件进行统计分析，计量资料以（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
用ELISA法检测9580例体检者AFP阳性例数为214例，阳性率为2.23%（214/9580）；对ELISA检测阳性的样本用化学发光微粒子免疫分析法（CLEIA）重新检测AFP水平， ELISA和CLEIA检测结果及阳性例数差异均无统计学意义（P>0.01），在AFP各检测浓度段确诊肝癌例数分别为：10.0～20.0 μg/L浓度段1例，确诊阳性率为0.8%；20～100 μg/L
浓度段3例，确诊阳性率为5.9%；100～300 μg/L浓度段14例，确诊阳性率为51.8%；>300 μg/L浓度段11例，确诊阳性率为100%。结果见表1。
3 讨论
近年来，随着检验医学的发展和对实验室质量要求的提高，人们越来越关注各检测系统间检测结果的相关性，如何实现不同实验室、不同检测系统对相同检验项目结果有较好的可比性，这对不同仪器互认和实验室认可非常重要 [6]。AFP是由胎肝细胞和卵黄囊合成的糖蛋白，是诊断原发性肝癌最灵敏的指标；AFP目前仍然是公认的早期诊断和筛查原发性肝癌的指标[7]，已广泛用于肝癌的普查、诊断、判断治疗效果和预测复发。AFP主要应用于发现和监测原发性肝细胞肝癌，其次应用于原发性肝癌的疗效监测[8]。而AFP也是各实验实间结果互认项目之一。化学发光法检测的试剂昂贵形成了成本高而难以在基层医院推广使用，也难以在大批量体检普查中使用。
虽然AFP特异性、敏感性不很理想，但仍是大规模体检、筛查肝癌所最常用的血清标志物[9]。本研究中，用ELISA法检测9580例体检者AFP阳性例数为214例，阳性率为2.23%，而ELISA和CLEIA检测结果及阳性例数差异均无统计学意义，从表1可见，确诊肝癌例数在AFP各浓度段均有阳性率，说明在10.0～20.0 μg/L浓度段肝癌发生可能性为0.8%，20～100 μg/L浓度段肝癌发生可能性为5.9%，100～300μg/L
浓度段肝癌发生可能性为51.8%，>300 μg/L浓度段肝癌发生可能性为100%。化学发光法在线性范围和精密度等方面明显优于ELISA法，但是在大批量的普查样本检测中，ELISA法具有快速、简便、成本低廉的优点，在健康体检、人群普查、良性肝病患者定期检查中起到很好筛查作用[10]。对于大批量的健康体检样本，无论是经济成本还是检测速度，ELISA检测AFP均优于CLEIA，其缺点是检测线性范围较小，但对于高值样本还能检测出阳性，只是对于后期的疗效观测不理想。所以，在大批量的健康体检普查肿瘤标志物，检测AFP使用ELISA法为最佳选择。
综上所述，ELISA定量检测AFP水平敏感性高，分AFP浓度段考虑诊断肝癌准确性高，AFP>300 μg/L肝癌发生可能性达100%，且试剂成本低，操作简便快速，适合大批量体检普查应用，对一时难以购买化学发光仪器的基层医疗机构，ELISA法也是一个很好而实用的诊断早期肝癌的检测方法。
参考文献
[1]沈铮，沈霞.甲胎蛋白及及异质体检测的临床应用价值[J].生海医学检验杂志， 2000，12（6）：361-362.
[2]张强，雷清.乙肝表面抗原大蛋白在基医院的应用[J].中国医药导刊 ，2008，12（8）：1249-1250.
[3]郑定喜，刘仿.Elisa与ICA法对甲胎蛋白检测的比较[J].中国医药科学，2011，5（9）：153.
[4]李金明. 临床酶免疫测定术[M].北京：人民军医出版社，2005：217.
[5]中国抗癌协会.新编常见恶性肿瘤诊治规范原发性肝癌[M]. 北京：北京医科大学与协和医科大学联合出版社，1999：22-23.
[6]李泰阶，李山，秦雪，等. 三台雅培全自动免疫分析仪测定AFP、CEA水平的可比性研究[J].标记免疫分析与临床，2009，16（4）：111-113.
[7]靳晓亮，杨波，关方霞，等.肿瘤与肿瘤标志物研究中证据的思考[J].新思维与新探索，2009，30（2）：48-50.
[8]董菊子，邓芝云，张峰，等.AFP CEA和CA199联合检测在原发性肝癌诊断中的应用[J].西北国防医学杂志， 2011，32（4）：123.
[9]王桂荣. 实验室诊断原发性肝癌几种方法的比较与评价[J].中国民康医学，2008，20（8）：724.
[10]洪霞，吴红波. 酶联免疫法和化学发光免疫法检测血清的比较[J].九江医学，2008，23（3）：54.
（收稿日期：2012-12-26） （本文编辑：陈丹云）