【摘 要】
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目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在5
【机 构】
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第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所分子生物学中心 创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室;
【基金项目】
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国家创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室自主课题(SKLZZ200805)
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目的优化pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺。方法筛选高拷贝质粒工程菌,通过优化培养基组分、发酵温度、补料成分和补料方式及培养时间,确定最佳发酵参数;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批,验证优化的发酵工艺的重复性。结果最佳发酵参数为:以甘油为碳源的培养基,发酵温度25℃,以50%Glycerol梯度恒速流加方式补料,培养时间为12 h;以最佳发酵参数在50 L发酵罐中连续发酵3批工程菌,菌体湿重和质粒含量分别达52.7～60.3 g/L和1.79～1.95 mg/g湿菌,质粒拷贝数为1012copies/μl,超螺旋质粒的比例达90%以上。结论优化了pUC118-ski/DH5α工程菌的发酵工艺,为重组质粒的规模化生产及下游纯化奠定了基础。
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