稳定表达猪水疱病病毒P1基因的PK-15细胞系的建立

来源 :畜牧兽医学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：liongliong573

【摘要】

：

从猪水疱病全长感染性cDNA中，应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因，并在目的片段的5′端引入Kozak序列（Kozak，1987），定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析

【作者】

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田宏吴锦艳龚真莉郑海学孙世琪尚佑军刘湘涛谢庆阁

【机构】

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中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室农业部畜禽病毒学重点开放实验室

【出处】

：

畜牧兽医学报

【发表日期】

：

2008年4期

【关键词】

：

猪水疱病病毒P1基因重组逆转录病毒载体 PK-15细胞基因表达 SVDV P1 gene retroviral vector PK-15 cell g

【基金项目】

：

国家863高技术研究发展计划（2003AA241110）

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从猪水疱病全长感染性cDNA中，应用PCR技术扩增到SVDV结构蛋白P1基因，并在目的片段的5′端引入Kozak序列（Kozak，1987），定向克隆于逆转录病毒载体pBABE puro。经PCR、酶切和序列分析鉴定，获得阳性重组质粒。将该重组质粒与水疱性口炎病毒载体pVSV-G共转染GP2-293细胞，收获假型病毒，在Polybrene的介导下感染PK-15细胞，嘌呤霉素筛选阳性细胞克隆。免疫荧光连续检测阳性克隆传代细胞，发现在不同代次的细胞中均有SVDV P1蛋白表达，而且表达的蛋白可被SVD阳性血清

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